p57kip2和ki67在胃癌组织中的表达及临床意义
【摘要】 目的： 探讨p57kip2和ki67在胃癌组织中的表达及临床意义。方法： 采用免疫组织化学Envision二步法检测40例胃癌组织的p57kip2和ki67表达水平。结果： p57kip2和ki67在胃癌组织中的阳性表达率分别为35﹪（14∕40）和87.5﹪（35∕40），两者的表达与胃癌组织的病理组织学分级及临床分期有关（P＜0.05），而与组织学类型无关（P＞0.05）；p57kip2与ki67表达强度呈负相关，相关系数r=-0.093（P＜0.01）。结论： p57kip2表达下调及ki67表达上调在胃癌的发生、过程中发挥着重要的作用。
【关键词】 蛋白质p53 ki?67抗原 癌 胃 免疫组织化学
胃癌是我国最常见的恶性肿瘤之一，其发生是多因素、多基因参与的复杂生物学过程。研究发现，p57kip2 具有负性调节细胞增生的生物学功能，可能具有对肿瘤的抑制作用，p57kip2失活与多种人类恶性肿瘤的发生和进展相关，包括肺癌、肝癌、结肠癌、胆管癌和胰腺癌等。 ki67广泛表达于增殖期细胞，是评价细胞增殖的较好指标，ki67表达增殖与多种恶性肿瘤的进展和预后相关。本研究采用免疫组织化学方法检测p57kip2和ki67在胃癌组织中的表达，探讨其与胃癌的发生及发展的关系。
1 材料与方法
1.1 研究对象
收集病理科2000-2004年确诊的40例胃癌标本，根据1999年WHO组织学分类标准分为两组：高分化组（乳头状腺癌或管状腺癌）16例，低分化组（低分化腺癌或未分化癌）24例。按照胃癌国际分期Ⅰ～Ⅱ期9例，Ⅲ～Ⅳ期31例。所有组织经10%中性福尔马林溶液固定，常规石蜡包埋切片。
1.2方法
1.2.1 主要试剂 鼠抗人p57kip2单克隆抗体为Santa Cruz美国公司产品,购于福州迈新生物公司; 鼠抗人ki67单克隆抗体及Envision试剂盒为Dako丹麦公司产品，购于成都基因公司。
1.2.2 免疫组织化学 采用Envision二步法，切片脱蜡，高温高压热修复，常规免疫组织化学染色。p57kip2和ki67工作稀释度分别为1∶120和1∶140。每批染色均设PBS代替一抗作为阴性对照，用已知阳性片作为阳性对照。阳性细胞判断标准：p57kip2和ki67阳性反应均呈棕褐色，颗粒状。p57kip2主要位于细胞核和细胞浆中，ki67只定位于细胞核。每张切片随机选取5个高倍视野计数500个肿瘤细胞，阳性细胞数≧50%为强阳性、49%～30%为阳性、29%～10%为弱阳性、≤10%为阴性。
1.2.3 统计学方法 采用SPSS 11.0统计软件包中χ2和Fish精确概率检验法统计分析数据。
2 结果
p57kip2阳性表达14例、阳性表达率35%，ki67 35例、阳性表达率８７.５%，两者与临床病理特征关系见表1。由表1可见，p57kip2和ki67表达强度与胃癌组织学类型无关（P＞0.05），而与病理组织分级及临床分期密切相关（P＜0.05）。癌细胞分化程度越低、临床分期越高，p57kip2的表达降低，而表1 p57kip2和ki67的表达与胃癌临床病理特征的关系ki67表达则越强。p57kip2与ki67呈显著负相关，相关系数为r=-0.093（P＜0.01）。
3 讨论
细胞周期调节失控是细胞过度增殖及癌变的重要原因，细胞周期蛋白依赖性激酶（cyclin?dependent kinase,CDKS）参与调控G1～S期及G2～M期转换，是细胞周期转换的关键物质，CDK抑制蛋白因子（CDK inhibitors,CDKIS）是CDK的负性调控因子，CDKIS依其结构和功能特点分为INK4家族和cip/kip家族，p57就是cip/kip家族中的一员，对细胞周期进行负调控。p57基因定位于染色体11.5上的D11S648和D11S679之间约2.2 kb的区域中[1,2], p57蛋白通过抑制CDK复合物的功能来实现其调控作用，它主要抑制CyclinE?CDK2、CyclinA?CDK2和CyclinD?CDK2等G1期和S期激酶复合物，使细胞周期无法完成由G1期和S期的转变，使细胞停滞于G1期，从而起到对细胞周期的负调控作用。正常情况下，p57kip2基因为父源基因印记，母源基因表达。报道肺癌患者存在p57kip2母源基因缺失，导致印记缺失，父源基因表达，提示p57kip2存在基因印记缺失（loss of imprinting, LOI）[3]。p57kip2、 p21waf1 cip1和p27kip2同属cip/kip家族,研究证实胃癌患者p21、 p27蛋白表达下调，提示p21、 p27基因参与胃癌的发生，其中p27kip2表达下调可能与泛素蛋白水解酶复合体活性升高有关。
肿瘤的发生、和转移是一个多基因参与的过程，抑癌基因的失活、癌基因的激活、蛋白的过度表达及失表达等均是肿瘤发生发展的重要机制。人体多种肿瘤存在p57kip2蛋白表达的下调与缺失，在大肠癌、卵巢癌、甲状腺癌、肝癌及膀胱癌等恶性肿瘤中均有报道[4～8]。Shin等[9]用RT?PCR法对30例胃癌及正常胃黏膜组织中p57 mRNA进行研究发现，与正常胃黏膜组织相比，在胃癌细胞中p57 mRNA的表达显著降低（P＜0.05）。Ito等[10]通过对90例肝细胞癌患者的调查表明，p57kip2表达的高低程度与肝细胞癌的分化程度存在显著相关性（P＜0.05）。这些结果揭示p57kip2在胃癌、肝细胞癌和胰腺癌中有着相似的生物学行为，与癌组织分化程度及临床分期有显著相关性，而且Red等通过研究证实，p57阳性表达的细胞绝大部分为终末期分化的细胞，说明p57kip2可能参与了癌细胞分化的过程，并在细胞周期转化的过程中起了调节作用。本研究发现，p57kip2与胃癌的分化程度有关。p57kip2的阳性表达率在临床Ⅲ～Ⅳ期及低分化胃癌组织中显著低于临床Ⅰ～Ⅱ期及高分化胃癌组，提示p57kip2可能是胃癌发生的负性调控因子，可能与LOI和泛素蛋白水解酶复合体活性异常相关，胃癌中p57kip2表达降低的机制仍有待于进一步的研究。
编码ki67的人类基因定位与第10号染色体的长臂上，ki67蛋白由相对分子质量为358 761 Da和319 508 Da的2条多肽链组成，由2个相连接的9 768 bp和8 686 bp的mRNA所编码。ki67的研究多用于判断肿瘤的良、恶性及恶性程度，也用于探讨细胞增殖活性、细胞周期与肿瘤的生长方式、浸润方式、复发及转移等生物学行为与预后的关系。ki67广泛表达于增殖期细胞，而不表达于静止期细胞，是评估细胞增殖的较好指标。Czyzewska等[11]研究证实ki67表达与肿瘤的分化程度、Lauren分型、淋巴结转移等明显相关，与年龄、肿瘤部位无关。本研究中的临床病理分析表明，ki67高表达与胃癌的肿瘤细胞分化程度、临床分期呈显著性相关（P＜0.05）。结果显示p57kip2和ki67的表达呈负相关，表明在胃癌中，p57kip2有抑制细胞增殖作用，是细胞增殖负性调节因子，ki67是反映胃癌进展的一个重要指标,是细胞增殖的正性调节因子。
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