HBV感染者血清标志物模式与HBV DNA的水平
作者：李媛媛 张莉莎 肖俊 鲍丽雅 田苗
【摘要】 目的： 探讨乙型肝炎病毒（HBV）感染者血清标志物模式与HBV DNA水平的关系。方法： 采用时间分辨荧光免疫定量分析法（TRFIA）和荧光定量PCR技术（FQ-PCR）分别检测542例乙型肝炎感染者血清HBVM和HBV DNA。结果： 542例乙型肝炎感染者血清标本HBVM模式有10种，HBV DNA检出总阳性率83.39%（452/542），各种模式HBV DNA的阳性率存在显著差异性，高拷贝数的HBV DNA主要存在于HBeAg阳性的各种模式中，与其它模式比较有显著差异（P<0.05）。结论： 动态监测HBVM和HBV DNA含量有利于对乙肝患者的诊断及疗效提供客观依据。
【关键词】 乙型肝炎病毒； 肝炎e抗原，乙型； 聚合酶链反应
［Abstract］ Objective: To analyze the relationship between modes of serological HBV makers (HBVM) and HBV DNA levels in HBV-infected people. Methods: HBVM and HBV DNA of 542 HBV-infected persons were assayed by using time resolution fluorescence immunological analysis (TRFIA) and fluorescence quantitative PCR (FQ-PCR) techniques. Results: The general HBV DNA positive rate was 83.29%. Ten modes of HBVM were found among the 542 HBV-infected persons, and the positive rates of HBV DNA were significantly different among different modes of HBVM. Higher copy levels of serum HBV DNA occurred mainly in patients with HBeAg positive mode, and were significantly different from those of patients with other modes (P﹤0.05). Conclusions: The dynamic monitoring on contents of HBVM and HBV DNA could provide objective references and is helpful to the diagnosis and treatment of hepatitis B patients.
［Key words］ hepatitis B virus; hepatitis B e antigens; polymerase chain reaction
目前，HBVM定量检测在确诊HBV感染中已广泛用于临床，与HBVM定性检测相比，具有高灵敏度、特异性强、无放射性污染等特点，能更准确反映出HBV感染者血清HBVM模型的多样性，并能直观、动态观察HBV感染者整个病程中血清抗原-抗体的转化过程及与HBV DNA的相关性，为HBV感染者的诊断、病程进展、转归及疗效判断提供可靠依据。采用TRFIA和FQ-PCR法定量检测2007年5~10月在本院肝炎门诊就诊的542例HBV感染者血清HBVM和HBV DNA，旨在探讨不同HBVM血清模式与HBV DNA的相关性。
1 对象和方法
1.1 检测对象
本文选取2007年5~10月在本院肝炎门诊就诊的乙型肝炎病毒感染病人共542例，年龄4~79岁，男363例，女179例。
1.2 HBVM定量检测
采用TRFIA法，仪器是1235时间分辨荧光免疫分析仪。试剂盒购自中山大学达瑞公司，严格按试剂盒说明操作。
1.3 HBV DNA
采用FQ-PCR法，试剂盒购自深圳匹基有限公司，严格按试剂盒说明操作。PE5700全自动荧光分析仪为美国PE公司产品，根据电脑分析处理实验数据，取其线性值，直接得出定量结果。阳性取≥103Copies/ml，阴性时取实测拷贝值，低于灵敏度以下作零拷贝处理。
1.4 诊断标准
乙型肝炎患者血清乙型肝炎标志物指标高于临界值则判为阳性，根据试剂说明和规定值范围：以HBS Ag＞0.5 μg/L，抗-HBs＞10 MIU/ml，HBeAg＞0.03 NCU/ml，抗-HBe＞1.5 NCU/ml，抗-HBc＞0.1 NCU/ml（NCU为卫生部临床检验中心单位）。
TRFIA法测定HBVM时，为表述方便将HBsAg设为1，抗-HBs设为2，HBeAg设为3，抗-HBe设为4，抗-HBc为5。HBVM模式用1~5表示，组别用罗马数字I~Ⅹ表示。
同时将FQ-PCR检测结果也分成3种情况：以HBV DNA滴度＜103~104 Copies/ml为低拷贝，105~106 Copies/ml为中拷贝，＞107 Copies/ml为高拷贝。
1.5 统计学处理
HBV DNA定量结果取其对数值，采用t检验进行统计学处理;HBVM定量结果采用t检验统计学处理。
2 结果
2.1 TRFIA法检测HBVM的结果见表1。
2.2 542例HBV感染者血清HBV DNA检出总阳性率83.39%（452/542），HBV DNA滴度在103~104 Copies/ml，有249份，占45.94%。HBV DNA滴度在105~106 Copies/ml，92份，占16.97%。HBV DNA滴度在107 Copies/ml，有112份，占20.16%。见表2。HBV DNA滴度越高，Ⅰ模式所占比例越高（P＜0.01），有极显著意义。
3 讨论
血清HBVM检测是临床诊断HBV感染的传统的方法， 是人体对HBV的免疫反应状态；HBV DNA检测HBV病毒自身，更准确灵敏的反映了HBV的感染和恢复情况[1]。
在HBV感染的不同时期，HBVM检测可出现不同形式组合模式[2]；HBVM各种模式的HBV DNA表达均显示有不同程度的病毒复制[3]。在所检测的542份标本中，出现了10种模式，对不同的表1 542例HBVM表现模式及阳性率检出情况表2 542例HBVM表现模式与HBV DNA阳性率及载量比较血清学模式进行HBV DNA的检测，发现Ⅰ模式HBV DNA的检出率是98.7%，与报道结果相似[4]。Ⅱ模式HBV DNA检出率是75.1%，Ⅲ模式的HBV DNA检出率是76.4%，Ⅱ模式、Ⅲ模式阳性率与Ⅰ模式的阳性率比较，P＜0.01，差异有显著性。与病毒HBV DNA载量差异也有显著性。
Ⅱ模式与Ⅲ模式的HBV DNA阳性率比较，P＞0.05，无显著意义，在HBeAg阳性的各模式（即Ⅰ、Ⅷ、Ⅸ模式）中比较，其HBV DNA阳性及病毒载量均无统计学差异。在病毒载量比较中，Ⅰ模式高、中拷贝数与Ⅱ模式和Ⅲ模式的高、中拷贝数比较，P＜0.05、P＜0.01，差异有显著性。表明HBeAg存在是病毒复制指标，同时表明了只要有HBeAg存在的各模式就代表病毒复制活跃及传染性强[5~7]。此类病人以高水平复制为主，而Ⅱ模式较，P＜0.05、P＜0.01，差异有显著性。表明HBeAg存在是病毒复制指标，同时表明了只要有HBeAg存在的各模式就代表病毒复制活跃及传染性强[5~7]。此类病人以高水平复制为主，而Ⅱ模式和Ⅲ模式HBV DNA低拷贝数与Ⅰ的低拷贝数比较P＜0.01，差异有显著性。Ⅱ模式与Ⅲ模式的高、中、低拷贝数比较，P＞0.05，无显著意义，此类病人以中、低水平复制为主，在Ⅱ模式中检测到少量高水平复制，说明HBeAg、抗-HBe发生血清转换后乙型肝炎病毒复制仍未停止，这与既往理论不完全吻合，可能与病毒变异等因素有关[8]。
在Ⅱ模式、Ⅶ模式中，HBV DNA阳性率及HBV DNA载量仍较高，组间比较无差异，前两者中都可能存在C区变异和S基因变异。总之，TRFIA法检测HBVM， 可出现各种模式组合：（1）有HBeAg存在的模式，代表病毒复制活跃及病毒载量高，传染性强；（2）抗-HBs、抗-HBe出现不是HBV清除或HBV复制停止的指标，要视HBV DNA的拷贝数而定；（3）HBeAg消失或抗-HBe出现时，部分患者HBV DNA载量低阳性检出率下降，但不能排除HBV复制；（4）HBVM的定量检测可直观、动态的观察HBV感染者血清中抗原-抗体的转换过程，对诊断、转归及药物治疗疗效提供可靠依据。
【】
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