Cyclin E 在子宫内膜癌中的表达及其临床意义

【摘要】  目的：探讨 Cyclin E 在子宫内膜癌中的表达及其临床意义。方法：采用免疫组织化学 S-P 法测定 16 例正常子宫内膜、18 例子宫内膜不典型增生及 50 例子宫内膜癌中的 Cyclin E 蛋白的表达情况。结果： Cyclin E 蛋白在正常子宫内膜中的表达率为 18.75%，明显低于在子宫内膜不典型增生中的表达（61.11%）及在子宫内膜癌中的表达（66.00%，P < 0.05）。50 例子宫内膜癌中，Cyclin E 蛋白在 G2、G3 中的表达率（87.10%）明显高于 G1（31.57%，P < 0.05）；在临 床分期Ⅱ~Ⅲ中的表达率（93.33%）亦高于Ⅰ期者（54.29%，P < 0.05）。结论：Cyclin E 的过度表达可能与子宫内膜癌的发生、密切相关，并提示可能与患者的预后有关。

【关键词】  子宫内膜癌；Cyclin E；免疫组织化学

    〔Abstract Objective To  investigate  the  expression  of  Cyclin  E  in  endometrial  carcinoma  and  its  relationship to  clinic  pathological  features  and  prognosis  of  endometrial  carcinoma.    Methods     An  immunohistochemical  S-P assay  was  used  to  detect  the  expression  of  Cyclin  E  in  specimens  of  50  cases  with  endometrial  carcinoma、16  normal  endometrium  and  18  atypical  hyperplasia.    Results     The  positive  immunostaining  rate  of  cyclin  E  in  endometrial  carcinoma  (66.00%)  was  significantly  higher  than  that  in  normal  endometrium  (18.75%).  In  50 cases  with  endometrial  carcinoma,  the  expression  of  cyclin  E  in  moderately-poorly  differentiated  (G2-G3)  and  stage  Ⅱ~Ⅲ  cases  was  significantly  higher  than  that  in  well  differentiated  (G1)  and  stage Ⅰ cases,  P  <  0.05.    Conclusion     The  results  suggest  that  cyclin  E  expression  is  closely  related  to  the  occurrence  and  development of  endometrial  carcinoma,  and  the  aberrant  expression  of  cyclin  E  may  act  as  a  predicator  of  poorer  prognosis of  endometrial  carcinoma.

    〔Key  Words〕    Endometrial  carcinoma;  Cyclin  E;  Immunohistochemistry

    细胞周期调控系统的紊乱与细胞癌变密切相关，Cyclin E 作为一种细胞周期正向调节因子已被证实是一种癌基因，在许多实验性肿瘤的发生发展过程中起重要作用[1]。本研究采用免疫组化方法，探讨Cyclin E 蛋白表达与子宫内膜癌生物学行为关系。

    1    资料与方法

    1.1    一般资料    从 2001 - 2007 年的存档蜡块中，随机抽取正常子宫内膜 16 例、子宫内膜不典型增生 18 例及子宫内膜腺癌 50 例。子宫内膜癌按FIGO（1988 年）手术分期，其中Ⅰ期 35 例，Ⅱ期 11 例，Ⅲ期 4 例；病理分级 G1 19 例， G2 27 例，G3 4 例。术前均未作化疗或放疗。

    1.2    试剂    鼠抗人 Cyclin E 单克隆抗体，免疫组化 S-P 试剂盒，DAB 均由福州迈新生物技术开发公司提供。

    1.3    方法    石蜡包埋组织连续切片厚约 5   m，采用免疫组化 S-P 方法进行染色，染色步骤按试剂盒要求进行。阳性对照：已知 Cyclin E 表达阳性的大肠癌组织；阴性对照：PBS 代替一抗。

    1.4    结果判断    以肿瘤细胞核或细胞质中出现棕黄色颗粒作为阳性细胞，根据阳性细胞数判断结果，阴性（-）：无阳性细胞或阳性细胞 < 5%，染色强度较浅；阳性（+）：阳性细胞数≥5%，染色强度中等以上[2]。

    1.5    统计方法    采用     检验和 Fisher's 确切检验。

    2    结    果

    2.1    正常子宫内膜、子宫内膜不典型增生和子宫内膜癌中 Cyclin E 蛋白的表达    见表 1。

    Cyclin E 蛋白在正常子宫内膜中表达率明显低于不典型增生及子宫内膜癌中的表达率，差异均有显著性意义（P < 0.05）；子宫内膜不典型增生中 Cyclin E 蛋白表达率稍低于子宫内膜癌中的表达率，但差异无统计学意义（P > 0.05）。

    2.2    Cyclin E 蛋白表达与子宫内膜癌临床病理特征的关系    见表 2。

    Cyclin E 蛋白在子宫内膜癌Ⅰ期中的表达率低于Ⅱ~Ⅲ期，比较差异有显著意义（     =7.13，P < 0.01）；Cyclin E 蛋白在内膜癌 G2~G3 中的表达则高于 G1，差异有显著性意义（     =16.18，P < 0.05）；肌层浸润 > 1/2 或有淋巴结转移组 Cyclin E 蛋白表达率亦高于于肌层浸润≤1/2 组，但差别无统计学意义（    = 1.26，P > 0.1）。

    2.3    Cyclin E 蛋白表达与子宫内膜癌复发的关系    见表 3。

    50 例子宫内膜癌患者，随访 3 年，失访 12 例，失访 率24%。余 38 例中未复发者 27 例。

    3    讨论

    肿瘤的发生是一个多步骤、多阶段逐步演进的 过程。近年来的研究表明，细胞周期失控是细胞癌变重要原因。真核生物细胞周期的调控有赖于细胞周期蛋白依赖性激酶（cyclin dependent kinase,  CDK）的活化，周期蛋白（cyclin）是 CDK 的正调节因子，活化 CDK 的活性。Cyclin E 基因定位于19q12-13[3]，转录 2.2 kb 的 mRNA，编码 395 个氨基酸的蛋白质。作为 G1 期核内蛋白，它结合并激活 CDK2 而直接促进细胞周期 G1/S 转换[4]。目前，在多种肿瘤中均可发现 Cyclin E 的基因扩增和蛋白表达失调[2，5-6]，Cyclin E 的异常表达可促进肿瘤的，并具有早期诊断和预后判断价值[7]。Marone 等[8]研究结果表明，卵巢癌的 Cyclin E 的扩增和过度表达率分别为 21% 和 29.5%。本组研究显示，50 例子宫内膜癌中，Cyclin E 蛋白阳性表达 33 例（66.00%），而正常组织中，只有 3 例（18.75%）阳性，子宫内膜不典型增生与正常内膜组织比较，Cyclin E 的表达率亦明显增高（P < 0.05）。本研究还显示 Cyclin E 在子宫内膜癌临床Ⅰ期中的表达率为 54.29%，低于Ⅱ~Ⅲ期的 93.33%，差异有显著性意义（P < 0.01），在高分化中的表达率为 31.57%，显著低于中、低分化的内膜癌的 87.10%（P < 0.05），但与肌层浸润深度无关。我们的资料还显示，38 例子宫内膜癌中有 11 例复发，其中 9 例 Cyclin E 阳性表达（81.82%）高于未复发组（48.15%），但差异无统计学意义，与 Kiyoshi 等[9]报道相似。本研究提示 Cyclin E 作为细胞周期正调节因子，当其过度表达时，可加速细胞增殖，导致肿瘤细胞异常增生，恶性程度增高。因此，临床上检测子宫内膜癌中 Cyclin E 的表达情况，可能有助于判断肿瘤的预后。

【】
  〔1〕Haas K , Staller P, Geisen C, et al. Mutual requirement of CDK4 and Myc in malignant transformation : evidence for cyclin D1/CDK4 and p16INK4A as upstream regulators of Myc〔J〕. Oncogene, 1997, 15:179-192

〔2〕Sakaguchi T, Watamabe A, Sawada H, et al. Prognostic value of cyclin E and p53 expression in gastric carcinoma〔J〕. Cancer, 1998, 82:1238-1243

〔3〕Geng Y, Eaton EN, Picon M, et al. Regulation of cyclin E transcription by E2Fs and retinoblastoma protein〔J〕. Oncogene, 1996,12(6):1173-1180

〔4〕Pardee AB. G1 events and regulation of cell proliferation〔J〕. Science, 1989, 24:603-608

〔5〕Scuderi R, Palucka KA, Pokrovskaja K, et al. Cyclin E overexpression in relapsed adult acute lymphoblastic leukemias of B-cell lineage〔J〕. Blood, 1996, 87(8):3360-3367

〔6〕Akama Y, Yasui W, Yokozaki H, et al. Frequent amplification of the cyclin E gene in human gastric carcinomas〔J〕. Japn J Cancer Res, 1995, 86:617-621

〔7〕Erlanson M, Portin C, Linderholm B, et al. Expression of cyclin E and the cyclin-dependent kinase inhibitor p27 in malignant lymphomas - prognostic implications〔J〕. Blood, 1998, 92, 770-777

〔8〕Marone M, Scambia G, Giannitelli C, et al. Analysis of cyclin E and CDK2　in ovarian cancer: gene amplification and RNA overexpression〔J〕. Int J Cancer, 1998,75:34-39

〔9〕Kiyoshi I, Hironobu S, Yuuji Y, et al. Immunohistochemical study of cyclin D and E and cyclin-dependent kinase (cdk) 2 and 4 in human endometrial carcinoma〔J〕. Anticancer Res, 1998, 18:1661-1664