妊娠组织中转化生长因子及其受体与早期复发性自然流产相关性研究

                      作者：韦枝红 宁克勤 龙淑芳 徐小平

【摘要】  目的：了解转化生长因子β1（TGF -β1）及其受体（TβR、Ⅰ、Ⅱ）在绒毛及蜕膜组织中的表达情况，初步探讨（TGF -β1）及（TβR）与早期复发性流产（RSA）的关系。方法：应用半定量逆转录 - 聚合酶链反应（RT-PCR）技术，检测 38 例 RSA 患者和 35 例正常早孕妇女的绒毛及蜕膜组织中 TGF -β1 mRNA，TβR（Ⅰ、Ⅱ型）mRNA 的表达情况。结果：TGF -β1 及 TβR、Ⅰ、Ⅱ型在正常早孕及 RSA 绒毛、蜕膜组织中均有表达，TGF -β1 在 RSA 组绒毛及蜕膜组织中表达水平为（0.18±0.02）、（0.12±0.01），对照组为（0.98±0.03）、（0.72±0.02）；TβR -Ⅰ在 RSA 组绒毛 及蜕膜组织中表达水平为（0.15±0.03）、（0.11±0.03），对照组为（0.71±0.01）、（0.73±0.01）；TβR -Ⅱ在 RSA 组 绒毛及蜕膜组织中表达水平为（0.16±0.01）、（0.09±0.01），对照组为（0.68±0.02）、（0.86±0.02）；上述指标 RSA组与对照组比较差异均有统计学意义（P < 0.01）。结论：TGF -β1 及 TβR 在绒毛及蜕膜组织中表达下降可能是早期复发性自然流产的重要原因之一。

【关键词】  转化生长因子β1；受体；复发性自然流产；滋养细胞；蜕膜

    〔Abstract〕 Objective  To  understand  the  expressions  of  transforming  growth  factor β1  (TGF -β1)  and  its  receptors  (TβR)  in  villi  and  decidua  during  early  pregnancy  and  their  effects  on  early  recurrent  spontaneous  abortion.    Methods     Expressions  of  TGF -β1  mRNA  and  its  receptors  were  detemined  in  villi  and  deciduas  by semi-quantitative  reverse  transcriptional-polymerase  chain  reaction  from  38  cases  of  spontaneous  abortion women  and  35  cases  of  normal  early  pregnancy  women  (control  group).    Results     TGF -β1  and  its  receptors had  expressioned  in  decidua  cells,  villis  glands  and  interstitial  cytoplasm  in  all  two  groups.  The  expressions  of TGF -β1  in  the  villi  and  decidua  of  spontaneous  abortion  and  control  group  were  (0.18±0.02),  (0.98±0.03) and  (0.12±0.01),  (0.72±0.02)  respectively.  The  intensity  of  TβR -Ⅰ in  the  villi  and  decidua  of  spontaneous  abortion  and  control  groups were  (0.15±0.03),  (0.71±0.01)  and  (0.11±0.03),  (0.73±0.01)  respectively.   And  the expressions  of  Tβ1R -Ⅱ in  the  villi  and  decidua  of  spontaneous  aboetion  and  control  groups  were  (0.16±0.01), (0.68±0.02)  and  (0.09±0.01),  (0.86±0.02)  respectively.  The  differences  between  the  control  group  and  abortion group  were  all  significant  (P  <  0.01).    Conclusion     The  expressions  of  TGF -β1  and  its  receptors  in  the  early  pregnancy  tissues  of  aborted  women  declined.  It  demonstrates  that  the  abnomal  expressions  of  TGF -β1  and  its   receptors  play  an  important  role  in  spontaneous  abortion,  they  are  one  of  the  causes  of  spontaneous  abortion.

    〔Key  Words〕    Transforming  growth  factor β;  Receptor;  Recurrent  Spontaneous  abortion;  Trophoblasl;  Decidua

    早期复发性自然流产（recurrcent spontaneous abortin, RSA）是指 2 次或 2 次以上的自然流产，其原因复杂，主要有遗传、内分泌、解剖、感染、免疫等因素，生殖免疫学认为妊娠是成功的半同种移植过程，正常妊娠体液免疫占主要优势，形成免疫内受，保护胚胎组织，而自然流产患者以细胞免疫为主，产生胚胎排斥作用，我们采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）技术，分别对 RSA 患者及正常早孕妇女的绒毛及蜕膜组织中 TGF -β1 mRNA 及其受体表达情况进行检测，探讨其与 RSA 发病的关系。

    1    资料与方法

    1.1    研究对象

    2004 年 4 月 - 2007 年 8 月，在我院门诊就诊，连续 2 次或 2 次以上自然流产患者 38 例、年龄 22~41岁，孕次 2~5 次，停经 40~90 d 并排除子宫畸形、感染、内分泌及夫妇染色体异常，既往无自然免疫性疾病史，选取同期正常早孕要求行人工流产 35 例作对照，年龄 23~40 岁孕次 2~6 次，停经 45~ 80 d，对照组无不孕、自然流产、死胎等不良孕产史，两组年龄、孕周、孕次、停经天数无显著差异。

    1.2    方法

    1.2.1    标本采集    复发性自然流产患者在确认胚胎停止发育或难免流产行清宫以及正常早孕 B 超证实宫内孕囊见心管搏动的孕妇行人工流产时，取绒毛及蜕膜组织，生理盐水漂洗，装入防冻管中待测。

    1.2.2    方法    采用 RT-PCR 技术检测绒毛、蜕膜组织 TGF -β1、TβR（Ⅰ、Ⅱ）的 mRNA，具体步骤参照[1，2]，RNA 逆转录试剂盒购自美国GIBCO 公司，引物由上海生物工程有限公司合成，应用瑞典生产 LKB2202 紫外凝胶扫描分析系统进行吸光度扫描，得出扩增产物灰度值（A），得到TGFβ1 及 TβR（Ⅰ、Ⅱ）mRNA 相对含量（扩增产物 A 值/参照系统βactin扩增产物 A 值×%）。

    1.2.3    统计学处理    各组测定值以均数±标准差表示采用 SPSS 10.0 统计软件对各组数据进行方差分析。

    2    结    果

    2.1    两组绒毛组织中 TGF -β1、TβR（Ⅰ、Ⅱ）mRNA 的表达

    在两组绒毛组织中细胞滋养细胞及合体滋养细胞均有表达，RSA 组表达明显低于对照组，差异有统计学意义（P < 0.01）。见表 1。

    2.2    两组蜕膜组织中 TGF -β1、TβR（Ⅰ、Ⅱ）mRNA  的表达

    两组蜕膜腺体细胞及间质细胞中均有 TGF - β1、TβR（Ⅰ、Ⅱ）阳性染色，RSA 组表达明显低于对照组，差异均有统计学意义（P < 0.01），见表 2。

    3    讨    论

    3.1    正常妊娠组织中 TGFβ及 TβR 的表达

    Simpson 等利用免疫组化和原位杂交技术发现， TGFβ1 及 TβR 分布于子宫内膜的腺体及间质中，其含量呈周期性变化，于月经周期的增生期含量最低，分泌期为增生期的 2 倍，妊娠早期的蜕膜中 TGFβ含量为增生期的 5 倍，妊娠后TGFβ1  刺激子宫内膜基质合成基质蛋白，使子宫内膜蜕膜样变，并刺激基质细胞合成甲状旁腺激素相关蛋白，促进滋养细胞将钙从母体运输给胎儿[3]，郝晶等[4]对着床小鼠子宫内膜中转化生长因子及其受体的研究亦证实了受孕子宫内膜表面上皮、基质细胞、蜕膜细胞中 TGFβ1 及 TβR 表达较未孕时显著增加。本研究显示正常早孕绒毛及蜕膜组织中均有大量的 TGFβ1 及 TβR 表达这与上述的实验结果相符，提示 TGFβ1 及 TβR 在维持正常早孕起着重要作用。

    3.2    TGFβ1 及 TβR 的异常表达与复发性流产的关系

    作为同种移植物的胎儿能够耐受母体免疫防御而不被排斥，与母 - 胎界面形成的免疫平衡有关，一旦平衡被打破，则产生流产，而这种免疫平衡主要由绒毛及蜕膜合成的多种肽类细胞因子有关，其中 TGFβ1 是一种调节细胞生长、分化的多肽，它抑制免疫活性细胞的增殖，抑制巨噬细胞的激活以及自然杀伤（NK）细胞对干扰素γ的反应性；抑制某些因子如干扰素γ、TNFα的产生及活性，故 TGFβ1 主要起到免疫负调节作用，在正常妊娠过程中，它起到免疫抑制作用，使母体对胚胎排斥的免疫应答反应被封闭，使妊娠维持，同时 TGFβ必须与特异性受体 TβRⅠ、Ⅱ结合，才能发挥其调节信号传导的生物学功能[5]，同时 TGFβ1 还有促进细胞形态的发生、增殖、分化作用，并调节胚胎滋养层的分化；本研究显示：复发性自然流产患者绒毛及蜕膜组织中 TGFβ1 及 TβR 表达均较正常妊娠组下降，提示复发性自然流产患者 TGFβ1 及 TβR 水平降低，不能诱导免疫耐受，从而影响胚胎着床及胎盘形成，导致胚胎被母体排斥，也从蛋白水平印证了 TGFβ1 及其受体在早期胚胎发育中的作用，为自然流产的免疫提供了一条新思路。

【】
  〔1〕Cao Y, Ji WR, Qi P, et al. Placenta growth factor: identification and characterication of a novel isoform generated by RNA alternative splicing〔J〕. Biochen Biophys Res Commun, 1997, 235:493-498

〔2〕姜泊, 张亚历, 周殿元. 分子生物学常用实验方法〔M〕. 北京:人民军医出版社, 1996. 282-300

〔3〕Simpson H, Robson SC, Bulmer JN, et al. Transtroming growth factor beta expression in human Placenta and placental bed during early pregrency〔J〕. Placenta, 2002, 23: 44-58

〔4〕郝晶, 高英茂, 刘故, 等. 转化生长因子β1及其受体在着床期小鼠子宫内膜中的免疫组织化学研究〔J〕. 解剖学报, 2001, 32:64-66

〔5〕曹泽毅. 中华妇产〔M〕. 北京:人民出版社, 1999. 98-99