氧化应激对非酒精性脂肪性肝炎发病的影响及枳椇子水提取液干预作用

【摘要】  目的：观察氧化应激对非酒精性脂肪性肝炎（NASH）发病的影响，评价枳椇子水提取液对NASH的预防作用。方法：用高脂饲料诱导NASH大鼠动物模型，同时给予枳椇子水提取液进行预防。观察枳椇子水提液对NASH模型大鼠肝组织丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）及谷胱甘肽氧化酶（GSH-PX）的影响及肝组织的病变化。结果：12周后，模型组肝匀浆中MDA含量明显高于正常组，SOD、GSH-PX呈下降趋势；肝组织呈脂肪变性和坏死性炎症改变。枳椇子水提取液可以明显减轻模型大鼠肝脏炎症和脂肪变程度（P<0.01），降低肝组织MDA （P<0.01），提高肝组织SOD、GSH-PX活性（P<0.01或P<0.05）。结论：氧化应激在非酒精性脂肪性肝炎的发生和中起重要作用；枳椇子水提取液能够减轻NASH模型大鼠肝组织的脂质沉积和炎性浸润，对NASH大鼠具有良好的预防作用。

【关键词】  NASH 大鼠 氧化应激 脂质过氧化 枳椇子

非酒精性脂肪性肝炎（NASH）的发病机制尚未完全阐明。研究表明，脂质过氧化损伤是NASH最主要的打击因素。本实验旨在通过高脂饮食建立NASH动物模型，检测肝组织中MDA、SOD、GSH-PX含量，探讨氧化应激对NASH发病的影响，评价枳椇子水提取液的干预作用。

    1  实验材料 

    1．1  实验动物  SD雄性大鼠60只，清洁级，体重200～250g，由浙江省实验动物中心提供，许可证号为 SYXK(浙)2005-0074，饲养于浙江省医学院实验动物中心。

    1．2  主要试剂  超氧化歧化酶（SOD）试剂盒、丙二醛（MDA）试剂盒、谷胱甘肽氧化酶（GSH-PX）试剂盒（美国ADL公司），购自上海浙沛生物技术有限公司。

    1．3  药物制备  枳椇子水提取液制备：取枳椇子适量（产地陕西），压扁，置小型提取器中，加水提取2次，合并滤液，制取0.2g/ml浓度枳椇子水提取液；硫普罗宁和多烯磷脂酰胆碱混合药液制备：硫普罗宁片(商品名：凯西莱，批号：061207，河南省新谊药业股份有限公司)和多烯磷脂酰胆碱片（商品名：易善复，批号：D8096，北京安万特有限公司）分别研粉，加蒸馏水配制成每毫升含凯西莱6mg、易善复13.68mg的混合药液。

    2  实验方法 

    2．1  造  模  正常实验大鼠每天用高脂饲料(普通饲料+100g/kg猪油+胆固醇)持续饲养12周，诱导实验性NASH大鼠模型 [1]。

    2．2  分组及给药   40只SD大鼠，随机分为正常组、模型组、对照组、枳椇子组。模型组按上述造模方法造模同时，每天给予蒸馏水10ml/kg，分2次灌服;正常组以标准饲料喂养，并每天给予10ml/kg蒸馏水，分2次灌服;枳椇子组在造模同时，每天给予枳椇子水提取液10ml/kg，分2次灌服。对照组在造模同时，每天给予硫普罗宁和多烯磷脂酰胆碱混合药液10ml/kg，分2次灌服，均连续12周。

    2．3  观察指标  处死大鼠，取肝组织加生理盐水(1∶9) 匀浆取上清液，采用化学比色法测定丙二醛（MDA）、超氧化歧化酶（SOD）、谷胱甘肽氧化酶（GSH-PX）。取肝组织HE染色，中华医学会肝病学会分会脂肪肝和酒精性肝病学组“非酒精性脂肪肝诊断标准” [2]观察病理改变。

    2．4  统计学处理  实验数据用（±s）表示，用SPSS13.0软件包进行数据处理，采用单因素方差分析。

    3  实验结果 

    3．1  肝组织脂肪变、炎症程度积分  模型组肝组织脂肪变及炎症程度积分较正常组明显增高，差异有显著性意义（P<0.01），提示造模成功。枳椇子组、对照组肝组织脂肪变及炎症程度积分较模型组明显减轻，差异有显著性意义（P<0.01）。枳椇组脂肪变及炎症程度与对照组比较，差异无显著性意义（P＞0.05），见表1。表1  预防各组大鼠肝组织脂肪变、炎症程度积分比较

　　3．2  肝组织MDA、SOD、GSH?PX含量  模型组肝组织MDA较正常组明显增高，SOD、GSH?PX较正常组明显减低，差异有显著性意义（P<0.01）；枳椇子组、对照组肝组织MDA较模型组明显减低，SOD、GSH?PX较模型组明显增高，差异有显著性意义（P<0.01）。枳椇子组MDA、SOD、GSH?PX与对照组比较，差异无显著性意义（P﹥0.05），见表2。表2  四组肝组织MDA、SOD、GSH?PX含量比较

　　4  讨  论 

    目前 NASH主要应用降脂药、抗氧化剂、保肝药以及胰岛素增敏剂等，由于NASH 发病机制的复杂性和诊断的特殊性，疗效不佳。

    枳椇子是鼠李科植物枳椇的成熟果实和种子，无毒，为药食两用物品，《本草纲目》记载该药“甘，平，无毒。止烦除渴，去膈上热，润五脏，利大小便”。我国民间也常用该药养肝保肝。实验研究证明，枳椇子对酒精性脂肪肝有较好的防治作用[3]。近年来，笔者临床使用枳椇子作为主药治疗非酒精性脂肪肝肝炎取得了较好的疗效。本实验结果表明，通过高脂饲料持续喂养12周后，肝脏发生了明显的脂肪变和炎症；同时肝组织MDA明显升高，肝组织GSH-PX活力、SOD水平均下降，提示脂质过氧化在非酒精性脂肪性肝炎的发生、中起重要作用。通过枳椇子水提取液治疗后肝脏脂肪病变、炎症程度明显改善，肝组织MDA水平均明显下降；肝组织GSH-PX活力、SOD水平明显提高，提示枳椇子水提取液对非酒精性脂肪性肝炎具有较好预防作用，其作用机制可能与提高肝脏SOD水平、GSH-PX活力，阻断脂质过氧化的链式反应，减少脂质过氧化产物MDA的形成、缓解氧化应激，保护肝细胞作用有关。

【】
  1 徐正婕,范建高，王国良，等.高脂饮食致大鼠非酒精性脂肪性肝炎肝纤维化模型.世界华人消化杂志，2002，(10)：392-396

2 中华医学会肝病学分会脂肪肝和酒精性肝病学组．酒精性肝病诊疗指南．肝脏，2006，11(1)：66-67

3 丁 静．枳椇子预防大鼠酒精性脂肪肝的实验研究．浙江中西医结合杂志，2007，17(3)，156-58