甲萘氢醌二磷酸酯钠的鼠伤寒沙门菌诱变性研究

                       作者：崔福春，史清水，汪岱迪        

【摘要】  目的 观察甲萘氢醌二磷酸酯钠的诱变作用。方法 应用鼠伤寒沙门菌回复突变试验研究了甲萘氢醌二磷酸酯钠的诱变作用，试验选用TA97、TA98、TA100、TA102菌株。结果 当甲萘氢醌二磷酸酯钠的浓度在0.5、5、50、500、5000μg/皿，无论加或不加S9混合物时其对4株沙门菌株的回复突变作用均为阴性。结论 甲萘氢醌二磷酸酯钠在体外对原核细胞无诱变作用。

【关键词】  甲萘氢醌二磷酸酯钠；诱变性；Ames试验

    【Abstract】  Objective  To observe the effect of menadiol sodium diphosphate induced mutation. Methods  The Salmonella typhimurium reverse mutation assay was used to study menadiol sodium diphosphate induced mutation.The strains of TA97,TA98, TA100, TA102 were used in this experiment.Results  When menadiol sodium diphosphate levels were at 0.1,1,10,100,1000 g per plate, It has no reverse mutation effect on the four strains of Salmonella whether the S9 mixture was addde or not. Conclusion  The results of the experiment show that menadiol sodium diphosphate has no mutation effects on the procaryotic cell in vitro.

    【Key words】  menadiol sodium diphosphate;mutation;Aames test

    甲萘氢醌二磷酸酯钠(menadiol sodium diphosphate,1)是维生素K3的水溶性衍生物，化学名为2-甲基-1，4-萘二酚二磷酸酯四钠六水合物。临床上用于多种原因所致出血的止血，也用作光敏剂恶性肿瘤。该化合物水溶性好，易于制成各种剂型［1］。本试验主要研究甲萘氢醌二磷酸酯钠是否存在引起基因突变的遗传毒性，为临床应用提供安全数据。

    1  试验材料

    1.1  受试药物  甲萘氢醌二磷酸酯钠，批号：031016，含量99.76%，为微红色粉末，溶于水，由南京澳新医药科技有限公司提供。试验时用0.9%氯化钠注射液稀释成各种浓度。

    1.2  阳性对照药  正定霉素，华北制药厂提供；2-氨基芴（2-AF）、甲基磺酸甲酯（MMS）由上海市药检所提供。

    1.3  菌株  鼠伤寒沙门菌组氨酸缺陷型菌株TA97、TA98、TA100、TA102由上海市药检所提供。菌株储存于-196℃液氮罐，试验前经鉴定符合生物学特性要求。试验菌于37℃水浴振荡培养10～20h，置冰浴备用。

    1.4  代谢活化剂  S9以多氯联苯（PCB）诱导雄性SD大鼠之肝匀浆，离心，取上层液速冻于-196℃液氮罐。Lowry法测定蛋白含量为35.2mg/ml，无菌试验阴性，用2-AF诱发TA100菌，鉴定S9具有活性。

    2  方法和结果

    2.1  试验方法  按标准Ames试验，全部采用平皿掺入试验，分别为-S9和+ S9，应用TA97、TA98、TA100、TA102四种菌，每个菌种设五个剂量组，最高剂量为5000μg/皿，最低剂量为0.5μg/皿。另加设阴性对照组和阳性对照组。试验平皿经37℃孵育48h后，计数回复突变菌落数。如果受试样品的回复突变数的增加与剂量相关并有统计学意义，或某一剂量组呈现可重复的回复突变数的增加并有统计学意义，则判为诱变阳性，反之为阴性［2］。

    2.2  试验结果  见表1。表1  甲萘氢醌二磷酸酯钠Ames试验结果注：* 为阳性结果

    结果表明：（1）各菌株阴性对照的回变菌落数均在正常允许范围内；（2）甲萘氢醌二磷酸酯钠各剂量组在加或不加代谢活化物试验中，均不引起回变菌落数的明显增加，同时甲萘氢醌二磷酸酯钠在本试验条件下对4株沙门菌株未产生致突变作用。

    3  讨论

    甲萘氢醌二磷酸酯钠为促凝血药,可促使肝脏合成凝血酶原等凝血因子,达到止血的目的。此外对内脏平滑肌痉挛引起的绞痛有明显抑制作用。为配合国内该药物的研制与开发，本文采用Ames试验观察该药对体外原核细胞是否具有诱变作用。

    Ames试验作为药品及化学品致突变的一种初筛试验已为世界所公认，其阳性检出率达80%，因此，Ames试验在致突变试验中起着非常重要的作用，它是以直接损伤DNA，引起DNA基因序列的改变作为终点［3］，但Ames试验的检测方法并不是检测化学品遗传毒性的唯一方法。在试验中甲萘氢醌二磷酸酯钠对4株沙门菌株回复突变为阴性，但在其他短期致突变筛选方法中是否有致突变作用有待进一步研究。

【】
  1 李玉艳，尤启冬. 二磷酸甲萘氢醌钠的合成工艺研究.医药杂志，2000，31（12）：529-530.

2 卫生部药政局编.新药（西药）临床前研究指导原则汇编. 1993,212.

3 Maron Dm,Ames BN.Rerised methods for the salmonella mutagenicity test. Mutation Res.1983,113-175.