三种梅毒酶联免疫诊断试剂的临床应用性

【摘要】  　　目的：评价不同品牌梅毒酶联免疫诊断试剂的质量，了解梅毒酶联免疫吸附方法在临床梅毒诊断中的应用价值。方法：应用三种不同品牌的梅毒酶联免疫吸附试剂（TP-ELISA）检测53份梅毒、37份非梅毒血清标本。以梅毒螺旋体明胶凝集确诊试验（TPPA）为标准，对相关试剂进行评价。结果：三种试剂的敏感性分别为：100%、94.3%、92.5%；特异性均为：100%；与临床的符合率为：100%、96.7%、95.6%；除Ⅰ期梅毒外的各期梅毒敏感性和特异性均为100%。结论：国产TP-ELISA试剂检测结果总体上与梅毒确诊试验（TPPA）一致，可代替TPPA应用于临床梅毒实验室诊断。

【关键词】  酶联免疫吸附试验 梅毒确诊试验 Ⅰ期梅毒 试剂评价

　　目前，随着基因工程表达的梅毒螺旋体特异性抗原的成功制备，用梅毒螺旋体酶联免疫吸附实验（TP-ELISA）方法检测梅毒感染的特异性和敏感性有了极大提高。该方法适合于大批量标本的梅毒特异性抗体的检测，现已被血站、体检单位等机构陆续使用。国内临床实验室梅毒确诊试验以梅毒螺旋体明胶凝集试验（TPPA）方法为主，对TP-ELISA试验的临床应用依然有争议［１～3］，影响了该方法在临床实验室的推广应用。为了确切了解国产TP-ELISA试剂的质量，探索其在临床实验室梅毒诊断上的应用可行性，特进行了以下比较性研究，现报告如下。

　　1  材料与方法

　　1.1  标本的选择
   
　　血清标本来自长治市三所皮肤性病门诊及病房病人，共90份，置－20 ℃冰箱保存、备用。
      
　　Ⅰ期、Ⅱ期、潜伏期梅毒的诊断均按《中华人民共和国梅毒国家诊断标准及处理原则》；后梅毒均为门诊确诊后随访的梅毒患者；麻风、系统性红斑狼疮（SLE）均为临床确诊患者，并且其梅毒非特异性抗体检测（RPR）结果阴性； HIV＋SYI为确诊患有Ⅰ期梅毒合并HIV感染者。具体标本构成见表1。

　　1.2  试剂的选择
   
　　TP-ELISA试剂：选择经国家有关部门合法注册的国产TP-ELISA试剂。所用试剂分别为上海科华、珠海丽珠、北京万泰。本次实验的所有试剂均由厂家无偿提供。 TPPA试剂为日本富士公司产品试剂。

　　1.3  方法
   
　　从－20 ℃冰箱中取出事先留取的90份血清标本，恢复至室温。将上海科华、珠海丽珠、北京万泰三种TP-ELISA试剂分别编号为A、B、C，TPPA试剂编为D。
    　　
　　TP-ELISA试验采用双盲操作，使用同一台洗板机、同一台酶标仪读取OD值。实验的具体操作步骤和结果判断严格按照各试剂盒说明书操作和判定。对结果与临床不符合的标本，取双孔复测，作为该试剂最终结果。以梅里埃的梅毒血清质控品作为本次实验的质控。

　　1.4  统计学处理
   
　　采用配对校正χ２检验。

　　2  结果
    　　
　　TP-ELISA试剂检测90份血清结果见表1。TP-ELISA试剂敏感性和特异性分别为：A试剂100%、100%；B试剂94.3%、100%；C试剂92.5%、100%；相对临床的符合率分别为：100%、96.7%、95.6%。
      
　　TP-ELISA试剂检测对Ⅱ期梅毒、潜伏梅毒、患有Ⅰ期梅毒的HIV感染者以及疗后梅毒的敏感性均为100％。三种试剂对Ⅰ期梅毒检测的敏感性分别为100％、85.7％、81.0％。与临床Ⅰ期梅毒不符合的标本中，包括2例硬下疳暗视野显微镜镜检找到梅毒螺旋体，血清RPR为阴性，TPPA为临界弱阳性，其TP-ELISA的OD值接近cutoff值。

　　表1  三种TP-ELISA试剂与TPPA试剂检测90份血清学结果（略）

　　三种TP-ELISA试剂与TPPA试剂检测结果之间的比较，经统计学分析各试剂检测结果之间无显著性差异（P＞0.05），见表2。

　　表2  TPPA与三种TP-ELISA试剂结果的比较（略）

　　3  讨论
       
　　三种TP-ELISA试剂的原理都是一步双抗原夹心法，特异性一致优良，达100%。敏感性有差异，除上海科华试剂外，珠海丽珠、北京万泰试剂对Ⅰ期梅毒标本产生漏检现象，推测可能与抗原纯度、几种包被抗原含量的构成比和工艺等有关。此两种试剂的敏感性还应有所提高，这样对于Ⅰ期梅毒的标本就能有较好的检出率。已有研究表明［４］，rTP47、rTP17和rTP15是梅毒苍白螺旋体特异性抗原，使用这三种重组表达抗原的ELISA试剂，有非常好的敏感性和特异性。
             
　　已有报道［２］，TP-ELISA对肿瘤、RF等标本的检测具有良好的特异性。我们的研究中，对于麻风和SLE标本的检测，各TP-ELISA试剂具有很高的特异性。周洪伟［１］和王传发［３］认为TP-ELISA法有较好的敏感性和特异性，可代替TPPA作为梅毒的确诊试验。
       
　　TP-ELISA试剂总体来说对于Ⅱ期、潜伏和疗后梅毒的敏感性和特异性都比较好，对于Ⅰ期梅毒的敏感性尚需提高。这三种TP-ELISA试剂的结果判定中，仅提供了阴性、阳性两种结果公式，没有设定“灰区”。我们发现，OD读数接近cutoff值的标本（0.5＜S/CO＜1)，其结果判断有一定的不可靠性。故建议有关试剂厂商能够设定“灰区”，检测人员对于读数位于“灰区”的标本能够采取双孔复测或者采用第二种方法进行检测。
    　　
　　本研究认为国产TP-ELISA试剂总体质量尚可，且该法有利于对实验进行室内质量控制和室间质评，可以应用于临床梅毒实验室诊断。

【】
  　　［１］ 周洪伟，林 松.三种方法检测梅毒螺旋体抗体的比较［Ｊ］.微生物学杂志，2005，25（3）：99～100.

　　［２］ 程艳杰，王广杰，王 旭，等.梅毒螺旋体血清学检测方法的实验室评价［Ｊ］.皮肤性病学杂志，2005，19（8）：503～504.

　　［３］ 王传发.TPHA及ELISA法检测梅毒特异性抗体能力的比较［Ｊ］.实用医技杂志，2005，12（5）：1　127～1 128.

　　［４］ 陈 坤，张贺秋，宋晓国，等.梅毒螺旋体优势表位抗原嵌合表达蛋白对国家参考品的反应性.中国生物品杂志，2003，16（2）：106～107.