松茸多糖提取工艺及质量测定

                 作者：廖丽娟,李英姬,金光洙 

【摘要】  ［目的］探讨松茸多糖的提取工艺.［方法］采用20g/L Na2CO3溶液在90℃条件下提取松茸多糖,采用苯酚?硫酸比色法测定松茸多糖质量.［结果］每kg松茸中可测得的松茸多糖质量为33.1g.［结论］最佳提取条件为90℃,20g/L的Na2CO3.

【关键词】  多糖类;植物提取物;植物,药用

    ABSTRACT:OBJECTIVETo study the methods of extraction and determination of polysaccharides in the tricholoma matsutake.METHODSCrude polysaccharides were obtained from the tricholoma matsutake throuth 20g/L  Na2CO3 extraction in 90℃, boiling water extraction. Then Phenol sulphate colorimetry was used to determine the content of polysaccharides of the tricholoma matsutake.RESULTSThe content of polysaccharides of the tricholoma matsutake is 33.1g.CONCLUSIONThe condition of extraction of polysaccharides in the tricholoma matsutake is 20g/L Na2CO3 extraction in 90℃.

    Key words:polysacharides;plant extracts;plants, medicinal

    松茸［Tricholoma matsutake （S. Ito et Imai）Sing］属担子菌门(Basidiomycota)担子菌纲(Basidiomycetes)伞菌目(Agaricales)口蘑科(Tricholomataceae)口蘑属(Tricholoma),它的菌肉肥厚,有香气, 味道鲜美,是名贵的野生食药用菌［1］.临床试验结果表明,松茸具有糖尿病,抑制癌细胞增植及抗应激反应等功效，主要药理活性成分为多糖类物质［2,3］.因此,松茸多糖的提取和含量测定对松茸的开发及应用有重要意义.

    1  材料

    1.1  试药与试剂  松茸采自吉林省龙井市三合松茸野生基地，用清水洗净,榨汁后切片放置3h,在60℃条件下干燥90min,准确称取质量,加入10倍量的二氯甲烷回流2次,每次３h,过滤,滤渣用10倍量的甲醇回流2次,每次4h,过滤,滤渣去除甲醇至无醇味，备用.葡萄糖对照品溶液的配制：精密称取105℃干燥至恒质量的葡萄糖25mg,用蒸馏水溶解并定容至100mL，备用.苯酚溶液的配制：取苯酚100g,加入铝片0.1g及NaHCO3 50mg,蒸馏,收集182℃馏分,称取馏分,配制质量浓度为50g／L的水溶液,置于棕色瓶内放入冰箱备用.其他试剂均为国产分析纯.

    1.2  仪器  所用仪器有UV?2201型紫外分光光度仪(日本津岛)、RE?52A型旋转蒸发仪(上海亚荣仪器有限公司)、HH?W恒温水浴箱（金坛市恒丰仪器厂）及202型电热鼓风干燥箱（金坛市恒丰仪器厂）.

    2  方法与结果

    2.1  测定条件的选择

    2.1.1  反应温度  精密吸取葡萄糖对照品溶液1.0mL，置于2个具塞试管中,加入蒸馏水1.0mL,苯酚液1.0mL,迅速滴加浓硫酸5.0mL.另取2个试管分别滴加蒸馏水2.0mL,同上操作,为空白液.1份在40℃水箱中恒温放置30min,余1份在沸水箱中放置30min，取出冷却至室温,15min后在490nm处测定吸光度值，分别为1.445，1.530,最终确定选择温度及时间为在沸水箱中放置30min.

    2.1.2  浓硫酸用量  精密吸取1.0mL葡萄糖对照品溶液5份,分别加入苯酚液1.0mL,再分别滴加浓硫酸4.0,5.0,6.0,7.0,8.0mL,加入蒸馏水稀释至10.0mL,所测得的吸光度值分别为1.110,1.115,1.210,1.312,1.552,1.553.最终确定浓硫酸用量为7.0mL以上,即体积分数为0.625以上.

    2.1.3  反应时间  精密吸取1.0mL葡萄糖对照品溶液3份,分别滴加蒸馏水1.0mL,再分别滴加浓硫酸7.0mL,分别于沸水浴内恒温反应20,30,40min，所测得的吸光度值分别为1.412,1.552,1.553,最终选择的反应时间为30min.

    2.2  标准曲线的绘制  精密吸取葡萄糖标准溶液0.1,0.2,0.3,0.4,0.5,0.6,0.7,0.8mL，置入具塞试管中,分别加入蒸馏水至2.0mL,再分别加入苯酚溶液1.0mL，摇匀,加入浓硫酸7.0mL,充分摇匀,静置10min,置于沸水箱内30min,取出,冷却至室温；另取1个试管以蒸馏水代替葡萄糖标准溶液作为空白对照,在490nm处测定吸光度值,以浓度为横坐标,吸光度值为纵坐标,绘制标准曲线,建立回归方程:A=6.0249X+1.1044,r=0.9995(n=8).结果表明,葡萄糖质量浓度在2.5～20.0mg／L范围内线性关系良好.

    2.3  提取松茸多糖的影响因素

    2.3.1  温度  分别于80℃,85℃,90℃,95℃,100℃条件下提取松茸多糖，所测得的松茸水提取液的多糖质量分别为10.1,13.0,15.2,17.1,18.9g/kg.

    2.3.2  酸碱盐介质  分别在90℃条件下利用质量浓度为30g／L的Na2CO3,NaCl,NaOH,HCl溶液及蒸馏水提取松茸多糖,所测得的松茸多糖的质量分别为31.9，19.5，33.5，24.8，15.2g/kg.

    2.3.3  温度及酸碱盐介质的质量浓度对松茸多糖提取的影响  通过正交法测得的松茸多糖质量见表1.由表1可见，松茸多糖的得率随着溶液浓度的增大及提取温度的升高而升高,但是高温和高pH值对多糖的结构及药理活性产生影响,故本实验选择20g／L Na2CO3溶液及90℃［4］.

    2.4  松茸多糖的提取及测定  取处理过的松茸适量，加入20g／L Na2CO3溶液，在90℃条件下提取2次,时间分别为2,1h,沸水中提取2次,时间分别为2,1h，合并榨汁、Na2CO3提取液及水提取液,定容,测定松茸多糖含量.结果示，每kg松茸中含松茸多糖的质量为33.1g,介于［5］报道的松茸菌盖和菌柄的多糖含量之间.表1  不同温度及酸碱盐介质质量浓度对松茸多糖提取的影响

    3  讨论

    通过筛选碳碱盐介质,发现利用Na2CO3,NaOH,HCl提取松茸多糖得率较高，但以酸作为提取介质时,对糖苷键具有破坏作用,降低多糖的得率;通过对提取温度进行筛选，发现提取温度为90℃时松茸多糖得率较高；通过正交法最终选择的提取条件为90℃,20g／L的Na2CO3.

【文献】
  ［1］ 周选围.松茸资源研究概况［J］.食用菌学报,2002，9(1):50.

［2］ 高菊珍,张红宇,乐无礼.松茸的免疫增强作用和抗应激作用研究［J］.中药药理和临床,1997,13(1):38.

［3］ 应建新,藏穆.西南地区大型真菌［M］.北京:北京出版社,1994.220.

［4］ 田光辉,陈文强.松茸多糖提取方法的研究［J］.氨基酸和生物资源,2003,25(2):33.

［5］ 田光辉.不同产地松茸子实体多糖含量测定及提取的研究［J］.延安大学学报,2003,22(3):53.?