北柴胡不同农家栽培类型与有效成分相关性研究

【摘要】  目的：通过对北柴胡4个不同农家栽培类型的有效成分的分析，确定最佳的栽培类型。方法：采用分光光度法测定柴胡总皂苷的含量；采用柱前衍生化HPLC－UV法测定柴胡皂苷a、d的含量。结果：4种类型在有效成分含量上从高到低依次为细根少分枝型、细根多分枝型、粗根多分枝型、粗根少分枝型。而粗根的栽培产量高于细根。结论：栽培时应首选粗根多分枝型柴胡根。

【关键词】  北柴胡 农家栽培类型 柴胡皂苷

    Abstract   Objective：To detected the contents of active components of four different Bupleurum Chinense DC. cultivars. Methods：The contents of total saikosaponin in Bupleurum chinense DC. were measured by spectrophotometry and the contents of saikosaponins a and d in Bupleurum chinense DC. were measured by HPLC-UV of precolumn derivatization. Results：The contents of total saikosaponin，saikosaponins a and d from high to low in turn were fine root and unbranched type，fine root and highly branched type，coarse root and highly branched type，coarse root and unbranched type，but the yield of coarse root type was higher than that of fine root type. Conclusions：Coarse root and highly branched type is the most suitable economical cultivation among four cultivars.

    Key words   Bupleurum Chinense DC.; different cultivars; saikosaponin

    北柴胡为《药典》（2005版）规定的药用柴胡，药用部位是伞形科柴胡属植物北柴胡（Bupleurum chinense DC.）的干燥根，具有解表和里、疏肝解郁、升举阳气之功效，用于感冒、上呼吸道感染、疟疾、寒热往来、肝炎、月经不调等［1~2］。北柴胡广泛分布于东北、华北、西北等地，由于市场需求增大，在山西、甘肃等地也相继出现了大面积的柴胡种植基地［3~4］。因此在栽培过程中出现了不同的农家类型，而不同的农家栽培类型的柴胡可能在有效成分方面存在差异。现对山西芮城县北柴胡种植基地的不同农家类型北柴胡的有效成分进行考察，为进一步筛选柴胡的优良品种提供依据。

    1   实验材料

    1.1   实验仪器

    紫外可见分光光度计；分析天平；恒温水浴锅；Waters 1525高效液相色谱仪；Waters 2487双波长紫外检测器；Breeze色谱工作站。

    1.2   药品与试剂

    北柴胡不同农家类型药材采自山西芮城北柴胡种植基地，并经过山西大学化学化工学院药学系秦雪梅教授鉴定。按照栽培类型可以将柴胡的根分为粗根少分枝型、粗根多分枝型、细根少分枝型和细根多分枝型四种类型（见图1中A、B、C、D）。柴胡皂苷a、d标准品由中国药品生物制品鉴定所提供，乙腈（为迪马公司产色谱纯），其余试剂均为分析纯。

    2   方法与结果

    2.1   溶液的制备

    2.1.1   供试品及对照品溶液的制备   称取各样品粗粉0.5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加入25 mL的2％ KOH-CH3OH 超声30 min，放冷，滤过，以2％KOH-CH3OH溶液定容至25 mL量瓶中，摇匀，即得。

    2.1.2   溶液的配制   精密称取柴胡皂苷对照品a、d置于10 mL棕色容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀（柴胡皂苷a 1.74 mg/mL，柴胡皂苷d 1.94 mg/mL）。

    2.2   分光光度法测定柴胡总皂苷

    依据［5］方法测定柴胡总皂苷，并绘制标准曲线及测定样品含量。精密量取上述柴胡皂苷d对照品溶液25 μL、30 μL、50 μL、75 μL、100 μL、125 μL、150 μL，蒸去溶媒后加1％对二甲氨基苯甲醛乙醇溶液0.1 mL，蒸干，加85％磷酸4 mL，70 ℃下加热30 min，冷却至室温，以水为空白，以545 nm为检测波长，测定吸光度。以吸光度值为纵坐标，柴胡皂苷d的浓度为横坐标，绘制标准曲线，得回归方程Y=0.003651X-0.039001，r=0.999 6。

    精密量取上述供试品溶液10 mL，置蒸发皿中，水浴上蒸干，残渣加正丁醇饱和的水10 mL溶解，置分液漏斗中，用水饱和的正丁醇提取3次，每次用量分别为20 mL、10 mL、10 mL，合并正丁醇层，置水浴上蒸干，残渣加甲醇溶解，定容至10 mL容量瓶中，摇匀。再移取此甲醇溶液0.5 mL，蒸去溶媒后方法与标准曲线溶液制备方法相同，测定结果见表1。

    2.3   HPLC-UV法测定柴胡中柴胡皂苷a、d的含量

    2.3.1   色谱条件   色谱柱：Hypersil ODS-C18柱（200 mm×4.6 mm，5 μm）；柱温：室温；UV检测波长：240 nm，250 nm；流动相：乙腈－水（40∶60）；流速：1.0 mL/min。

    2.3.2   样品的测定   精密量取2.2项下的供试品溶液1 mL，置于5 mL容量瓶中，加入4％ HCl-CH3OH溶液1 mL，摇匀后静置于室温下反应4 h，再加2％ KOH-CH3OH溶液1.5 mL，用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。临用前过0.45 μm滤膜，作为样品溶液。取20 μL样品溶液注入色谱仪，按照2.3.1项下色谱条件测定峰面积，其含量。结果见表1，对照品、样品HPLC图谱见图2。

    2.3.3   回收率试验   精密称取已知含量的样品6份，分别加入柴胡皂苷a、d对照品溶液，按上述色谱条件测定，计算回收率，结果见表2。

    3   结   论

    北柴胡农家栽培类型的有效成分含量中细根明显高于粗根，而从种植产量角度首选粗根，所以建议栽培时注意应首选粗根多分枝型柴胡根。多分枝型北柴胡地上部分具数茎，因此从地上形态可直接区分根分枝多的类型［6］。

【参考文献】
  ［1］国家药典委员会. 中华人民共和国药典（二部）［M］. 北京：化学出版社，2005：198.

［2］《全国中草药汇编》编写组. 全国中草药汇编（上册）［M］. 北京：人民卫生出版社，1972：691.

［3］院中国植物志编辑委员会. 中国植物志（第55卷第2分册）［M］. 北京：科学出版社，1979：290.

［4］刘天慰. 山西植物志（第3卷）［M］. 北京：中国科学技术出版社，2000：337.

［5］王兰霞，杨玲霞，张伯崇. 甘肃省庆阳地区栽培柴胡质量考察［J］.中国中药杂志，1994，19（10）：596-597.