复方苦黄洗剂的质量标准研究
作者：赵平 李彦龙 郭艳霞 方明余 高明焕
【关键词】 大黄；苦参；黄柏；质量；评价标准
复方苦黄洗剂（批准文号：冀药制字Z20051604）是临床上用于清热燥湿、消瘀止痛、收敛止血，湿热蕴结下注、瘀血阻络所致的内痔、外痔、混合痔、肛周湿痒、炎症及妇科带下病、阴道炎、外阴瘙痒等的常用药物。由大黄、苦参、黄柏、百部、白矾、蛇床子、花椒、芒硝、五倍子、地榆、防风、甘草12味药材组成。大黄为该制剂主药之一，其中大黄素、大黄酚是大黄的主要有效成分。药理研究表明，大黄煎剂对葡萄球菌、溶血性链球菌等多种细菌，以及一些常见致病性真菌和流感病毒等均有不同程度的抑制作用。测定煎剂中的有效成分的含量对临床合理用药具有指导意义。
1 材料与方法
1.1 仪器与药品
1.1.1 仪器
高效液相色谱仪（series Ⅲ泵，Model 500检测器，N2000工作站）；1/10万分析天平（德国METTLER TOLEDO公司）。
1.1.2 药品
中药材由河北省唐山市丰南区中制剂室提供，大黄对照药材(生物制品检定所，批号：120902-200408)，大黄素对照品（中国生物制品检定所，批号110756-200110），大黄酚对照品（中国生物制品检定所，批号110796-200412），苦参碱对照品（中国生物制品检定所，批号110725-200506），盐酸小檗碱对照品（中国生物制品检定所，批号110713-200208），甲醇色谱纯（天津四友试剂厂），磷酸、三氯甲烷、甲醇、甲酸、乙醇等均为分析纯，水是纯化水，硅胶G薄层板（青岛海洋化工厂）。
1.2 方法
1.2.1 薄层鉴别
1.2.1.1 大黄的鉴别
取本品15 mL，加盐酸1.5 mL，水浴上加热30 min，放冷，用三氯甲烷振摇提取2次，每次20 mL，合并三氯甲烷液，蒸干，残渣加甲醇1 mL使溶解，作为供试品溶液。另取大黄对照药材0.5 g，同法制成大黄对照药材溶液。照薄层色谱法［1］试验，分别吸取大黄供试品溶液5 μL，大黄对照药材溶液4 μL，分别点于以同一以羧甲基纤维素纳为黏合剂的硅胶G薄层板上，以石油醚(30～60℃)－甲酸乙酯－甲酸（15∶5∶1）的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，日光下检视。
1.2.1.2 苦参的鉴别
取本品20 mL，用氨试液调pH值至9～10，加氯仿振摇提取2次，每次20 mL，合并氯仿提取液低温蒸干，加乙醇2mL使溶解，作为供试品溶液。另取苦参碱对照品，加乙醇制成每mL含1 mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法［1］试验，吸取上述2种溶液各3 μL，点于同一硅胶G薄层板，以醋酸乙酯-丙酮-苯-氨水（6∶2∶6∶0.2）为展开剂，展开，取出，晾干，喷稀碘化铋钾试液，光下检视。
1.2.1.3 黄柏的鉴别
取本品5 mL，水浴蒸干，加甲醇5 mL使溶解，滤过，滤液作为供试品溶液。另取盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成每mL含1 mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述2种溶液各3 μL，分别点于同一硅胶G薄层板，以苯－乙酸乙酯－甲醇－异丙醇－水（20∶10∶5∶5∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365 nm）下检视。
1.2.2 含量测定
1.2.2.1 溶液的配制
①大黄素、大黄酚对照品混合储备液：精密称取大黄素对照品、大黄酚对照品适量，加无水乙醇－乙酸乙酯（2∶1）混合溶液制成每mL含大黄素10 μg、大黄酚24 μg的混合溶液，即得。② 样品溶液：取供试液20 mL用0.45 μm微孔滤膜过滤即得，备用。
1.2.2.2 色谱条件
色谱柱为Hypersil ODS2分析柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），甲醇-0.1％磷酸溶液（85∶15）为流动相，流速为1.0 mL/min，检测波长为254 nm。进样量为20 μL。在选定的色谱条件下测得的色谱图见图1(见封3)。由图1可见，大黄素、大黄酚的保留时间分别为10.79 min和15.57 min，分离效果良好。
1.2.2.3 测定方法
1.2.2.3.1 线性关系的考察
分别精密吸取对照品储备液1、2、3、4、5 mL，置10 mL量瓶中，加流动相至刻度，照上述色谱条件分别进样20 μL，记录色谱峰面积。
1.2.2.3.2 精密度试验
在上述色谱条件下，取大黄素浓度为9.88 μg/mL、大黄酚浓度为24.1μg/mL的混合对照品溶液，连续进样5次，测定大黄素和大黄酚相对标准偏差(RSD)。
1.2.2.3.3 稳定性试验
取本制剂按1.2.1.1项下方法制备好后0、2、8、12、24 h分别进样20 μL，测定大黄素和大黄酚的RSD。
1.2.2.3.4 重复性试验
取同一批次的供试品5瓶，分别按1.2.1.1项下的方法进行处理后进样，测定大黄素和大黄酚的RSD。
1.2.2.3.5 加样回收率试验
取已知浓度为大黄素5.84 μg/mL、大黄酚15.36 μg/mL的供试品溶液5份，每份5 mL，分别加入已知浓度为大黄素9.88 μg/mL和大黄酚24.1 μg/mL的混合对照品溶液5～10 mL量瓶中，混合，按1.2.1.1项下方法进行处理，测定大黄素和大黄酚的平均回收率和RSD值。
1.2.2.3.6 样品的测定
取060101批、060102批、060103批样品，按1.2.1.1项下操作，精密吸取此溶液20 μL，注入高效液相色谱仪中，记录色谱图，按外标法以峰面积含量。
2 结 果
2.1 薄层鉴别
2.1.1 大黄的鉴别
供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的黄色斑点，而阴性对照无干扰。见图1(封3)。
2.1.2 苦参的鉴别
供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上，显相同颜色斑点，而阴性对照无干扰。见图2(封3)。
2.1.3 黄柏的鉴别
供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上，显相同颜色荧光斑点，而阴性对照无干扰。见图3(封3)。
2.2 含量测定
2.2.1 线性关系的考察
将峰面积Y与相应的浓度进行回归处理，计算回归方程为，大黄素：Y＝3079717＋75.4X，r＝0.9998；大黄酚：Y＝5636054-13546.4X，r＝0.9999。见图4，5。
实验结果表明,大黄素浓度在0.988～4.94 μg/mL范围内呈良好的线性关系，大黄酚浓度在2.41～12.05 μg/mL范围内呈良好的线性关系。
2.2.2 精密度试验
测得大黄素RSD＝0.55％，大黄酚RSD＝1.39％。见表1、2。图6。表1 大黄素精密度试验结果（略）注：1为大黄素；2为大黄酚 表2 大黄酚精密度试验结果（略）
2.2.3 稳定性试验
测得大黄素的RSD＝1.31％，大黄酚的RSD＝1.26％，结果表明样品在24 h内含量稳定。见表3。表3 大黄素稳定性试验结果（略）表4 大黄酚稳定性试验结果（略）
2.2.4 重复性试验
测得大黄素的RSD=0.96％，大黄酚的RSD=0.88％。见表5、6。表5 大黄素重复性试验结果（略）表6 大黄酚重复性试验结果（略）
2.2.5 加样回收率试验
实验结果大黄素的平均回收率为100.5%，RSD值为1.42%；大黄酚的平均回收率为99.82%，RSD值为1.30%。见表7、8。表7 样品的测定结果（略）表8 大黄酚加样回收率试验结果（略）
2.2.6 样品的测定
按外标法以峰面积计算含量。见表7。
3 讨 论
本试验对复方苦黄洗剂进行了质量控制标准研究，增加了大黄、苦参、黄柏的薄层鉴别，建立了采用高效液相色谱法测定处方中大黄的有效成分大黄素、大黄酚含量测定的方法，样品处理方法简单，薄层色谱图清晰，含量测定结果准确，重复性良好，可用于该制剂的质量控制。
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［1］国家药典委员会.药典：一部［M］.北京：化学出版社，2005：461
