OPG、OPGL在骨肉瘤中的表达及其意义
【摘要】 目的 探讨OPG及 OPGL在骨肉瘤中的表达及意义。方法 采用免疫组化方法研究骨肉瘤、骨软骨瘤中OPG、OPGL的表达并分析其差异性。结果 骨肉瘤与骨软骨瘤OPG的表达有显著性差异，骨肉瘤与骨软骨瘤OPGL的表达无显著性差异。结论 骨肉瘤中存在OPG高表达，可能与骨肉瘤的成骨性有关。
【关键词】 OPG OPGL 骨肉瘤 骨软骨瘤
Expressions of OPG and OPGL in Osteosarcoma and Their Significance.
Key words：OPG;OPGL;Osteosarcoma;Osteochondroma
骨肉瘤是最常见的原发性恶性骨肿瘤，好发于青少年，恶性程度高，预后差，致死率、致残率高。Osteoprotegerin(OPG),Osteoprotegerin Ligand (OPGL)是近年来发现的重要的细胞传导通路因子，许多研究证实OPG、OPGL在骨质疏松、免疫性骨关节疾病、恶性肿瘤并发体液性高钙血症、癌症骨转移、骨巨细胞瘤等骨科疾病中起到了重要作用。本实验通过免疫组织化学方法研究OPG、OPGL 在骨肉瘤及骨软骨瘤中的表达，并分析其表达差异性。
1资料与方法
1.1实验资料
收集同济2001年1月～2004年1月手术切除石蜡包埋骨肉瘤标本31例，男性18例，女性13例，年龄12～57岁；骨软骨瘤标本20例，男性11例，女性9例，年龄15～21岁。标本经甲醛固定，常规石蜡包埋，切片厚度5μm。兔抗OPG、OPGL抗体，SABC试剂盒购自武汉博士德公司。
1.2实验方法
采用免疫组织化学SABC法，染色步骤按SABC试剂盒说明操作，一抗工作浓度为1∶100，所有切片染色前均经抗原修复。
1.3结果判定
光镜下观察染色切片，胞浆或胞膜出现棕黄色颗粒为阳性细胞。每张切片随机观察5个高倍视野按阳性细胞所占比例分为“?”：细胞未染色；“+”：阳性细胞<50 %;“ ++ ” : 阳性细胞>50 %。
1.4统计学分析
采用SPSS 10.0软件分析。
2结果
31例骨肉瘤标本中， OPG阳性率为87%（27/31），且16例为强阳性表达，阳性切片中可见骨肉瘤细胞胞浆棕黄色颗粒，而对照组骨软骨瘤中20例标本中阳性率为15%（3/20），且均为低表达。两组比较有显著性差异。在骨肉瘤各分型中，骨母细胞型87%（13/15），软骨母细胞型83%（5/6），纤维母细胞型90%（9/10），各组间无显著性差异。OPGL的阳性表达骨肉瘤42%（13/31），骨软骨瘤20%（4/20）。两组间无显著性差异。
3讨论
OPG、OPGL分别于1997、1998年被发现。现在他们被发现在骨代谢、免疫系统、心血管系统、内分泌等方面起到重要作用。而且今年来发现他们也参与许多骨肿瘤的发生、。比如骨巨细胞瘤[1]、骨髓瘤[2，3]、恶性肿瘤的骨转移[4]、Paget’s骨病[5]等。关于它们的研究多限于溶骨性骨肿瘤，而在成骨性骨肿瘤的方面报道极少，本实验通过研究OPG、OPGL在骨肉瘤中的表达，希望揭示其在骨肉瘤发生发展中起到的作用，并为下一步的研究打下基础。
3.1OPG、OPGL与骨肉瘤的成骨性
众所周知，骨肉瘤的组织学特点是大量肿瘤样骨及成骨性肿瘤细胞的形成。现已发现OPG的主要功能是抑制破骨细胞的分化,抑制成熟破骨细胞的骨吸收活性并诱导其凋亡。OPG 作用于破骨细胞抑制骨吸收有三条途径: ① OPG 最主要的作用是与OPGL（RANKL） 相结合,阻止RANK与RANKL结合,拮抗RANKL对破骨细胞分化和活性的影响;② 破骨细胞细胞膜上存在一种分子质量为140KD的蛋白质,OPG可以与该蛋白特异结合直接抑制破骨细胞功能。这一过程没有RAN KL及其受体RAN K的参与;③ 通过干扰基质细胞与破骨细胞之间的相互作用,诱导破骨细胞凋亡。而OPGL（RANKL）可促进破骨细胞分化,增强成熟破骨细胞的活力,阻止破骨细胞凋亡。OPGL与破骨细胞表面的RANK结合后,激活的RANK将信号传入细胞内。RANK膜内区有3 个结合位点,与TNFR 相关因子(TNF receptor?associated factors,TRAFs) 中的RAF1、2、3、5 及6 结合后,可激活转录因子NF?kB 和蛋白激酶JNK,从而促进破骨细胞的增殖、分化、成熟及骨吸收活性。骨肉瘤的发生过程中可能存在类似机制，从而使骨肉瘤产生大量的肿瘤样骨。
3.２OPG、OPGL与骨肉瘤的发展机制
研究证实OPGL 可阻止树突状细胞凋亡、促进T细胞增殖,这些作用可被OPG阻断,而激活的T细胞表达的OPGL 可直接促进破骨细胞生成，由于此机制骨肉瘤细胞通过分泌大量OPG，既形成大量肿瘤骨，可能又在骨肉瘤的早期发生的免疫逃避机制中起到了重要作用。
另外Emery 等于1998 年确认了OPG为TRAIL 的第五个受体，现已证实OPG是TRAIL３个诱骗受体中的一个，而TRAIL 具有大量、快速诱导凋亡的作用,这一点只有FasL 可以与其相提并论,但与后者不同的是,TRAIL 仅诱导转化细胞、肿瘤细胞和病毒感染细胞发生凋亡,而能够使正常细胞逃逸它的杀伤作用。并且有试验证实OPG可以对抗TRAIL对骨髓瘤细胞[6]、乳腺癌细胞[7]的凋亡作用。如果通过干预骨肉瘤细胞OPG的表达，可能会提高骨肉瘤对TRAIL的敏感性，从而找到一个骨肉瘤的更有效的措施，这也是我们下一步的研究方向。
本实验研究结果表明，OPG在骨肉瘤中高表达，这提示其可能在骨肉瘤的发生、发展及骨肉瘤的成骨性中起重要作用。
【】
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