IL-8 基因多态性与中国人群乳腺癌关系的研究
作者：刘继永 翟祥军 靳光付 胡志斌 马红霞 钮菊英 徐耀初 沈洪兵
【摘要】 ［目的］ 研究IL-8（Interleukin-8）基因-251、IL-8RA+860位点基因多态性与乳腺癌发生的关系。［方法］ 用PCR-RFLP分析方法检测647名健康对照人群和426例乳腺癌患者的IL-8基因多态性。用Logistic回归模型各种基因型的乳腺癌风险（OR）及其95％可信区间。［结果］ 乳腺癌患者的IL-8-251AA基因型携带者患乳腺癌的风险比IL-8-251TT基因型降低了16％（OR=0.84，95%CI=0.58~1.23），而携带IL-8RA+860GC/CC基因型可以增加乳腺癌发病风险28％（OR=1.28，95%CI=0.91~1.78），但两者联系均未达到统计学显著性水平。［结论］ IL-8-251和IL-8RA+860位点等位基因多态性可能与我国女性人群乳腺癌的发生存在一定的联系，值得进一步研究。
【关键词】 IL-8 基因多态性 乳腺肿瘤 分子流行病学
在大多数的发达国家，乳腺癌是造成妇女疾病负担的主要原因[1]。近20年来，乳腺癌的发病率在我国也显著增长。有许多因素可以造成不同的基因损伤，比如紫外线辐射、电离辐射、化学致癌剂等都可以诱发乳腺癌[2]。
IL-8是一种主要由中性粒细胞产生的强有力的中性粒细胞趋化因子和活化因子[2]，在炎症、感染、损伤、组织缺氧、酸中毒等病理状态下产生[3，4]，对嗜碱性粒细胞和T细胞也有一定的趋化作用，这些生物活性与溃疡性结肠炎、结直肠癌的发生密切相关[5]。目前认为TNF-α、IL-1、IL-6诱发的炎症反应很大程度上是通过诱导以IL-8为代表的趋化因子的产生而实现的。Hoffmann等[3]报道了IL-8的产生机制是非常复杂的，其中涉及到转录过程和转录后过程的很多方面。Esther等研究2个乳腺癌细胞系显示了IL-8 RNA稳定性在IL-1α的激活与IL-1β介导下，与持续的上调IL-8 mRNA和蛋白表达的水平有关[6]。在IL-8的启动子区，-251T存在着基因多态性；在IL-8RA+860位点也存在着基因多态性。为此我们设计了为基础的病例对照研究，以探讨IL-8 T-251A 和IL-8RA G+860C 多态性在女性人群乳腺癌的发病中是否起着某种作用。
1 材料与方法
1.1 研究对象
研究对象来自2004年1月至2005年8月期间江苏省5家三甲医院的病确诊的乳腺癌患者426例，以及以年龄为匹配条件的647名来自社区的健康对照。所有的研究对象均为无遗传关系的汉族女性。调查表由训练有素的调查员以面对面访问的形式完成。调查的信息包括人口学信息、月经生育史、肿瘤家族史、饮食运动生活史等。调查后采集外周静脉血5ml。
1.2 IL-8基因多态性的检测
我们设计的引物为5′-AGCTCCACAATTTGGTGAATTATTAA-3′(-251 正向)，5′-TGATCTTGTTCTAACACCTGCCA-3′ (-251 反向)，对IL-8 T-251A 位点进行扩增，产物为113bp；5′-TGTTGTTGCGGCGCTCAGAG-3′(+860正向)，5′-AGAAGCACCGAGCCATGAGGGT-3′(+860反向)对IL-8RA G+860C位点进行扩增，产物为141bp。IL-8-251存在AseⅠ酶切位点，将扩增的-31A/A基因型片段切为87bp和26bp两个片段，而-31T/T基因型仍保留全片段。IL-8RA+860G/G基因型被SacⅠ酶切为119bp和22bp两个片段，而+860C/C则切不开。IL-8基因的酶切产物以琼脂糖凝胶电泳，溴乙锭染色，紫外灯下观察结果。
1.3 统计方法
病例组和对照组的人口学数据统计，基因型频率，等位基因分布用χ2 检验以及 t检验。IL-8 T-251A和IL-8RA G+860C不同基因型与乳腺癌发病风险之间的关系，用单因素和多因素Logistic回归计算OR和其95%CI。数据处理用Statistical Analysis System 软件 (v.8.0e; SAS Institute, Cary, NC)。
2 结 果
本研究中的乳腺癌患者（即病例组）年龄比对照组大（52.06岁vs 47.39岁，P<0.01）。与健康对照组相比，乳腺癌患者的初潮年龄偏小（15.29岁 vs 16.14岁，P<0.01），而首胎活产生育年龄比较大（25.54岁 vs 24.29岁，P<0.01）。在已经绝经的研究对象中，乳腺癌患者的绝经年龄要低于对照人群（48.70岁 vs 49.73岁，P<0.01）。此外，肿瘤家族史在病例组与对照组之间也存在统计学差异。见表1。
在乳腺癌患者中IL-8-251A和IL-8RA+860C等位基因频率分别为0.377和0.102，而在对照中分别为0.399 和 0.097，差异均无显著性(P值分别为0.307和0.719)，见表1。
在乳腺癌患者中，IL-8 T-251A三种基因型的频率分别为39.0%(TT)， 46.7%(CT)，以及14.3%(AA)；而在对照中为35.9% (CC)，48.5% (CT)和15.6% (TT)，两组人群之间差异无显著性(P=0.568)。同样，在病例组中IL-8RA G+860C基因型频率分别为80.8%(GG)，18.1%(GC)，以及1.2%(CC)；在对照组中分别为82.2%(GG)，16.1% (GC)和1.7% (CC)，同样不存在显著性差异(P=0.561)，由于CC突变型纯合子频率相当低，使之与GC基因型合并统计。Logistic回归分析显示，与-251T等位基因比较，-251A等位基因可能会降低乳腺癌的危险(对于-251AA，校正OR=0.84，95% CI=0.58~1.23)，差异无统计学意义。此外，联合基因型+860 GC/CC可能会增加乳腺癌发病风险 (OR=1.28，95% CI=0.91~1.78)，但差异亦无统计学意义。见表2。
在调整年龄、初潮年龄、首胎年龄和肿瘤家族史混杂因素后，绝经后女性携带IL-8RA+860CG/C基因型可增加患乳腺癌的风险53%（OR=1.53，95%CI=1.00~2.40），其各基因型频率分布在病例与对照组间差异有显著性。而绝经前女性携带IL-8RA+860CG/CC基因型却可能降低乳腺癌发病风险48% （OR=0.52，95%CI=0.33~0.84），差异亦有统计学意义。在绝经前女性中，乳腺癌患者携带IL-8-251AT/AA突变基因型的比例显著高于对照者，结果显示IL-8-251A等位基因可能增加患乳腺癌的发病风险85%（OR=1.85，95%CI=1.27~2.72）。而绝经后的女性携带IL-8-251AT/AA突变基因型可能会降低患乳腺癌的发病风险25%（OR=0.75，95%CI=0.52~1.07），差异接近统计学意义（表3）。其他因素的分层分析后并没有发现与IL-8基因之间有明显的关系。
3 讨 论
本研究中，我们以人群为研究对象，采用病例对照研究设计探讨了IL-8基因的两个单核苷酸多态性位点与乳腺癌发病风险之间的关系。研究发现IL-8启动子区-251位点基因型以及IL-8RA+860位点基因型的改变与乳腺癌的发病风险存在一定的联系。
Stefano等[7]关于结直肠癌的研究中，发现了在IL-8-251位点存在A等位基因可能会降低肿瘤的发病风险。而Zhang W等[8]研究发现携带IL-8RA+860 GC 基因型的人群相对于携带GG基因型的人群，患结直肠癌的风险增加55%(95%CI＝0.8~3.0)，但差异无显著性。
一些关于白细胞介素8（IL-8）因子研究的文章中，讨论了其在不同的肿瘤细胞中调节细胞功能的作用[9]。有许多研究报道高浓度的IL-8表达与乳腺癌肿瘤的扩散和浸润高度相关，可能与IL-8因子的生成与体内雌激素的水平有关[10，11]。我们在乳腺癌的研究中发现-251位点携带等位基因A能够轻微地降低乳腺癌的发病风险，特别是在具有肿瘤家族史的人群中，等位基因A的保护作用更强（OR=0.67，95%CI＝0.39~1.15）。在人群中关于胃癌的一项研究中也有同样的发现，认为T等位基因会增加胃癌的发病风险[12]。但是中国人群研究中也有不同的结果，一些研究认为A等位基因会增加胃癌的危险[13]。
我们发现IL-8-251位点和IL-8RA+860基因位点的多态性与绝经状况和肿瘤家族史有比较密切的关系，绝经前女性携带IL-8RA+860 CG/CC基因型可能降低乳腺癌的风险约48%，绝经后女性携带IL-8RA+860 CG/CC基因型可增加患乳腺癌的风险53%，各基因型频率分布在病例与对照组间差异有显著性。在绝经前女性中，乳腺癌患者携带IL-8-251AT/AA突变基因型的比例显著高于对照者，IL-8-251A等位基因携带者患乳腺癌的风险显著增加了85%。而绝经后的女性携带IL-8-251AT/AA突变基因型的可能会降低患乳腺癌的风险25%，差异接近统计学意义。然而，由于该两位点与乳腺癌关系的主效应无统计学显著性意义，上述来自分层分析的结果是初步的，其意义尚待进一步论证。
【】
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