AB-8大孔吸附树脂分离小叶榕叶水提物中黄酮类化合物的研究

　　3.2  AB-8大孔吸附树脂对小叶榕叶黄酮的动态解吸结果［11］

　　3.2.1  不同体积分数解吸剂的洗脱效果吸附层析法是根据被分离物质与树脂之间吸附力强弱来选择不同的洗脱剂和相应的洗脱剂浓度。对于极性不大的大孔树脂和被分离物来说，洗脱剂极性越小，洗脱能力就越强；对于极性较大的大孔树脂和被分离物而言，则用极性较大的溶剂较为合适。由于乙醇极性大，毒性低，易浓缩回收，较适合作为解吸剂。本试验取适量AB-8 树脂，以40 ml 吸附液进行吸附，控制吸附流速为2.60 ml/min，再分别取40 ml 10%，30%，50%，70%，95% 的乙醇溶剂进行洗脱，解吸流速控制为2.60 ml/min，收集各洗脱液，然后测定它们的吸光度值。结果见图5。

    由图5 可以看出，采用体积分数50% 以上的乙醇水溶液进行解吸时具有较高的解吸率，且解吸率增幅平缓。因此，体积分数50% 以上的乙醇水溶液解吸效果较好。考虑到溶剂消耗问题，取洗脱浓度50%为宜。

　　3.2.2  不同用量解吸剂的洗脱效果在确定洗脱剂洗脱的最佳浓度后，还需要对洗脱剂的最佳用量进行确定，其原则是在充分洗脱下所吸附的物质的前提下，尽量节省洗脱剂的用量。以50 ml 吸附液进行吸附，控制吸附流速为2.60 ml/min，重吸附1次，待吸附完全后，再用水洗脱至流出液清亮，分别取30%，50%，70%乙醇溶剂进行洗脱，解吸流速控制为2.60 ml/min，分步收集各洗脱液，然后测定它们的吸光度值。结果见图6 。
   
　　由图6可知，当洗脱液体积从2 ml增加至10 ml时，洗脱液的黄酮浓度增加8～18倍，而洗脱液体积从10 ml增加到20 ml时,洗脱液的黄酮浓度逐步下降，从20 ml增加至40 ml，黄酮浓度基本不变，洗脱完全。可以看出，采用体积分数70%和50% 乙醇进行解吸时，洗脱峰集中，对称，无明显拖尾现象，50%乙醇洗脱峰基本与70%乙醇洗脱峰重叠，考虑到成本以及生产周期的问题，洗脱剂用量选择30 ml，浓度选择50%乙醇洗脱比较合适。

　　3.2.3  动态解吸速度洗脱流速与树脂的孔径、孔容、粒度、吸附物质分子结构及浓度、操作温度等因素有关，最佳流速可通过解吸率、纯度等指标确定。以40 ml 吸附液进行吸附，控制吸附流速为2.60 ml/min，重吸附1次，当吸附完全后，先用水洗脱至流出液清亮，再采用50% 乙醇进行柱上洗脱，流速分别为1.17，2.60，3.30，4.60，5.28 ml/min， 收集洗脱液，分别测定它们的吸光度值。结果见图7。

    由图7可知，随着解吸速度增加，解吸率随之降低。解吸速度为1.17，2.60 ml/min时的解吸率较高，综合考虑生产周期及洗脱效果，选择解吸速度2.60 ml/min为宜。

　　3.2.4  不同pH值解吸液的洗脱效果洗脱剂的pH值对其洗脱能力有显著影响。通过改变洗脱剂的pH值，可使吸附物质形成较强的离子化合物，很容易被洗脱下来，从而提高洗脱率。以50 ml吸附液进行吸附，控制吸附流速为2.60 ml/min,重吸附1次，当吸附完全后，用水洗脱至流出液清亮，用酸和碱调节50%乙醇水溶液至不同pH值4.0，5.0，6.0，7.0，8.0，9.0，控制解吸流速为2.60 ml/min,分别收集各洗脱液，测定它们的吸光度值。结果见图8。

    由图8可知，随着洗脱剂pH值加大，洗脱液的洗脱能力增强，考虑过大的pH对黄酮类化合物后处理及部分化合物结构稳定性的影响，建议采用洗脱剂pH不超过8.0。

　　4  结论

    AB-8 树脂对小叶榕叶的黄酮吸附量大，易解吸，是一种理想的纯化小叶榕叶有效成分的吸附剂，比较适合于对小叶榕叶黄酮类化合物的提取分离。

    考虑纯化过程中的生产周期及树脂吸附性能，样品液中吸附过程中采用上样流速2.60 ml/min，上样液浓度15 mg/ml，pH=5.0时效果最好。

    当用体积分数大于50%的乙醇水溶液作为洗脱剂时，能将小叶榕叶黄酮基本解吸出来，洗脱峰集中，对称性好，无明显拖尾现象，洗脱周期短，洗脱效果显著。

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