比色法测定知母总皂苷含量

　　2.9   加样回收实验 

　　精密吸取含量测定项下样品溶液50μl，按含量测定方法处理，分别加入对照品液100μl，测定吸收度，并以相同样品同样处理(不加对照品液)为对照。结果见表4。表4  加样回收率测定结果（略）

　　3  讨论
   
　　香草醛、茴香醛和二甲氨基苯甲醛都是鉴定皂苷常用的显色试剂。考察结果表明，香草醛和茴香醛试剂(Anisaldehyde试剂,即A试剂)均可用作测定知母皂苷的显色体系，但香草醛的稳定性不及茴香醛，而在以知母皂苷AⅢ做对照时，不宜用盐酸二甲氨基苯甲醛试剂(Ehrlish试剂,即E试剂)作显色体系。这是因为，F环闭环的单糖链皂苷和螺旋甾烷衍生皂苷只对A试剂显黄色,对E试剂不显色，而呋甾既可对E试剂显红色反应,也可对A试剂显黄色反应［8，9］。由于知母皂苷AⅢ属于F环闭环螺甾皂苷，故不能用E试剂显色，但样品中因含有呋甾皂苷故呈现淡红色，但以知母皂苷AⅢ做对照时，应选择A试剂作为总皂苷含量测定试剂。
   
　　对比色条件优化结果显示，本试验最佳条件为100℃反应5 min,与文献报道［7，8］的100℃反应15 min稍有不同，可能是皂苷种类不同，该法标准曲线在25～150 μg范围内线性关系良好,平均回收率为98.2%(RSD=3.18%)，可用于测定知母提取物中皂苷物质纯度检查。该法所测定的吸收度随加热温度以及加热时间的改变而改变，因此测定时要在最佳比色条件下,严格按照操作步骤进行。
   
　　对9批知母提取物测定结果表明，各批次之间含量接近，说明本实验建立的分离提纯方法是稳定的。

【参考文献】
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　　［2］Zhang J,Meng Z,Zhang M,et al.Effect of six steroidal sapouius isloated from anemarrhence rhizoma on plactelet aggregation and hemolysis in human bolld［J］.Clin Chim Acta，1999，289(1/2):79.

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　　［4］赵树进,韩丽萍,李俭洪．知母皂苷及其苷元对动物模型β肾上腺素受体的调整作用［J］.中国医院药学杂志,2000,20(2):70.

　　［5］邓云,徐秋萍，刘振权，等.知母皂苷化合物对脑缺血再灌注大鼠的保护作用［J］.北京中医药大学学报,2005,28(2):33.

　　［6］李春梅,高永林,李敏，等.知母皂苷对小鼠血糖的影响［J］.中药药理与临床,2005,21(4):22.

　　［7］李林洲,余伯阳.比色法测定短葶山麦冬药材中总皂苷含量［J］.海峡药学,2005,17(3):44.

　　［8］T Konishi,S Kiyosaw a, J Shoji.Studies on the Coloration Mechanism of Furostanol Derivatives with Ehrlich Reagent Ⅰ［J］.Chem Pharm Bull,1984,32(6):2111.

　　［9］T Konishi,S Kiyosaw a, J Shoji.Studies on the Coloration Mechanism of Furostanol Derivatives with Ehrlich ReagentⅡ［J］.ChemPharmBull,1985,33(2):591.