早期自然流产患者蜕膜组织中iNOS的表达及意义
作者:范建辉 曾韶英 滕奔琦
【摘要】 目的 通过测定早期自然流产患者蜕膜组织中诱导型一氧化氮合酶的表达,探讨其与自然流产发病的关系。方法 应用免疫组织化学法,对41例妇女蜕膜组织中诱导型一氧化氮合酶的表达进行检测,其中20例为早期自然流产患者(流产组),21例为要求终止妊娠的正常早孕妇女(对照组)。结果 在早期妊娠的蜕膜组织细胞浆内,间质细胞浆内和腺上皮及腔上皮细胞浆内均有iNOS的表达;早期自然流产组蜕膜组织中iNOS的表达(2例呈阴性,2例呈弱阳性,10例呈阳性,6例呈强阳性)明显强于对照组(2例阴性,10例弱阳性,7例阳性,2例强阳性),两者比较,差异有统计学意义(P=0.026)。结论 早期自然流产患者蜕膜组织中诱导型一氧化氮合酶呈高表达,iNOS可能与自然流产有密切的相关性。
【关键词】自然流产;早期妊娠;诱导型一氧化氮合酶
【Abstract】 Objective To investigate the expression of inducible nitric oxide synthase in the decidua tissue(iNOS),and to study the role of it in the pathogensis of spontaneous abortion.Methods The expression of iNOS was measured by means of immunohistochemical method.Of 41 women recruited in this study,20 women suffering from early spontaneous abortion(abortion group)and 21 women undergoing elective termination of normally progressing pregnancies(control group).Results Positive staining of inducible nitric oxide synthase was localized in cytoplasm of stromal cells、glang epithelial and huminal epithelium of decidua tissue with early pregnancy.The expression of iNOS in the decidua of early spontaneous abortion group(2 negative,2 weakly positive,10 positive,6 strong positive)were higher than those in control group(2 negative,10 weakly positive,7 positive,2 strong positive).There was statistic difference among them(P=0.026).Conclusion The obvious increase in iNOS in decidua tissue with early spontaneous abortion can be observed,which may play an important role in the genesis of spontaneous abortion.
【Key words】
Spontaneous abortion;Early pregnancy;Inducible nitric oxide synthase
自然流产是妊娠早期衰退孕囊死亡的普遍表现形式,在年轻、健康妇女中,早期妊娠的自然流产率在所有临床观测的妊娠中约为10%,然而自然流产的确切机制仍不明确[1]。导致早期自然流产的原因很多,流产是免疫、内分泌及炎症反应等整合的结果。免疫因素在流产的过程及预防中起重要作用[2]。本研究拟通过测定早期自然流产蜕膜组织中诱导型一氧化氮合酶的表达,了解诱导型一氧化氮合酶在蜕膜组织中表达的主要部位,探讨其与自然流产的关系。
1 资料与方法
1.1 研究对象 早期自然流产组:选择2007年10月至2008年12月在中山大学附属第三医院妇产科门诊就诊的20例早期自然流产患者。妊娠10周内,经临床病史、体征、血HCG、B超检查确诊为胚胎死亡。均排除解剖、遗传、内分泌、感染等因素及其他内科疾病。平均年龄(28.35±4.48)岁,平均妊娠天数(47.60±7.60)d。
对照组:同期在中山大学附属第三医院妇产科门诊要求行人工流产终止妊娠的21例健康妇女。年龄20~33岁,身体健康,月经规律(周期28~30 d),停经70 d内,3个月内未服用甾体类药物,未放置宫内节育器。经妇科检查,尿HCG检测及B超检查证实为宫内胚胎存活且符合孕周,排除感染性疾病及其他内科疾病。平均年龄(27.57±4.68)岁,平均妊娠天数(49.52±7.03)d。
两组孕妇的年龄及妊娠天数比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。
1.2 方法
1.2.1 仪器及试剂 电热恒温培养箱(厦门医疗电子仪器厂)、微波炉(顺德格兰仕电器有限公司)、日本奥林巴斯显微镜BX51。试剂主要有:兔抗人iNOS多克隆抗体(浓缩型)(Santa cruz公司),二抗(羊抗兔)、SBC复合物、APES粘片剂均购至福州迈新公司,水性封片剂,迈新试剂AEC-0038(福州迈新公司)。
1.2.2 测量方法 各组均在确诊后,在常规消毒铺巾下用膜式电动吸引器行吸宫流产术,负压40~60 KPa,即刻收集蜕膜组织,生理盐水冲净血液后,10%中性缓冲福尔马林(浓甲醛10 ml,0.01M,pH:7.4,PBS 90 ml)固定24 h以制备石蜡切片。石蜡包埋切片厚度为5 um。切片常规脱蜡至水,用3%H2O2。浸泡灭活内源性酶,在滴加正常山羊血清封闭液前切片均需微波修复抗原,而后依次加入正常山羊血清封闭液、稀释的一抗、二抗工作液、链酶亲和素一过氧化物酶复合物,DAB(3,3-2氨基联苯胺)显色,封片。所有试验均采用在同一条件下进行。结果判定,iNOS表达在细胞浆上,判定标准以细胞浆出现明显的棕黄色颗粒为阳性,无着色或与背景颜色一致为阴性;随机选择5个高倍视野,根据多数细胞的染色强度计算强度得分,无着色为0分,淡棕黄色为1分,棕黄色为2分,深棕黄色为3分;阳性率和强度计分相加的结果:0~1分为(-),2分为(+),3~4分为(++),5~6分为(+++)。
1.2.3 统计学处理 全部统计学分析均采用SPSS14.0软件包进行,等级资料采用WIcoxon秩和检验分析。
2 结果
2.1 iNOS在蜕膜组织中的表达 21例正常早孕组蜕膜组织中iNOS的表达在细胞浆内,间质细胞浆内有表达,2例不着色为阴性,10例弱阳性染色,7例呈阳性染色,2例呈强阳性染色;腺上皮及腔上皮细胞浆内也有iNOS的表达,其中13例呈弱阳性染色,4例呈阳性染色,2例呈强阳性染色,2例呈阴性。20例自然流产组蜕膜组织中iNOS的表达均在细胞浆内,间质细胞内有表达,其中2例不着色,2例呈弱阳性染色,10例呈阳性染色,6例呈强阳性染色;腺上皮及腔上皮细胞也有表达,其中4例不着色,5例呈弱阳性染色,5例呈阳性染色,6例呈强阳性染色。(图1、2、3、4)。
2.2 自然流产组与正常早孕组蜕膜组织中iNOS表达的比较 自然流产组蜕膜组织中iNOS的表达大部分呈阳性、强阳性表达(16例),正常早孕组蜕膜组织中iNOS的表达大部分呈阴性、弱阳性表达(12例),少部分阳性、强阳性表达(9例);由此可见,流产组与正常早孕组两者比较差异有统计学意义(P=0.026),自然流产组蜕膜组织中iNOS的表达等级强度较正常早孕组强,即流产组蜕膜组织中iNOS的表达强于正常早孕组。(表1)
表1
自然流产与正常早孕蜕膜组织中iNOS表达(例)
类别总例数
iNOS
-++++++
自然流产组2022106
正常早孕组2121072
P值0.026
注:P<0.05差异有统计学意义
3 讨论
3.1 正常早孕妇女和早期自然流产iNOS的表达
既往研究表明[3,4],iNOS只表达于子宫内膜的腺上皮及腔上皮细胞,间质细胞无iNOS的表达;而在早期妊娠蜕膜组织的间质细胞可见iNOS的表达,说明蜕膜组织的间质细胞具有表达iNOS的潜能,一旦处于适当的条件,就可以表现出来。本研究提示正常早孕组与早期自然流产组蜕膜组织的大部分胞浆内,包括间质细胞和腺上皮及腔上皮细胞均有iNOS的表达,其中以间质细胞为著。这可能与蜕膜组织间质细胞中巨噬细胞、淋巴细胞更丰富,能产生更多的细胞因子有关。
