中药抗流感病毒实验研究进展

【关键词】  中药 抗流感病毒 实验研究

流感病毒属正粘科病毒,是一类对粘蛋白具有特殊亲和性的RNA病毒。根据病毒抗原所在部位不同分为内部抗原和外层抗原两类：内部抗原的核心为单链核糖核酸蛋白;外层抗原为糖蛋白,包括血凝素(Hemagglutinin,H)和神经氨酸酶(Neuramindase,N)。根据其抗原性质不同,流感病毒分为甲(A)、乙(B)、丙(C)型;又将其病毒分为若干亚型(H1～H15,N1～N9)。B型和C型流感病毒抗原性较稳定,A型是造成流行的主要病原,其病毒表面抗原HA和NA较易发生变异。目前,预防和流感的西药主要有M2离子通道抑制剂、NA抑制剂和流感疫苗,前两种药物副作用相对大，且随着应用的广泛易产生耐药性，而疫苗仅对已知的流感病毒亚型有预防作用,对于由抗原性漂移或抗原性转换所产生的新型流感病毒无效。因此，抗流感病毒药物研究显得尤为重要和紧迫。

    流感在中医学中称为“时行感冒”,属疫疠类(即传染病),祖国医学认为人体感受风邪(病原)侵袭,而机体免疫力低下，不足以抗邪而致病,尤当气候突变、寒暖失常时更易发病。中药抗流感病毒的基本作用机制是扶正祛邪或祛邪扶正。虽然每味中药成分比较复杂,中药方剂作用机制更为复杂,但中草药抗流感病毒途径主要有两条:(1)直接灭活或抑制病毒；(2)通过调节人体免疫功能而间接抗病毒。

    1  具有抗流感病毒作用的单味中药及其主要成分

    一类中药具有直接抗流感病毒作用，其中大多数为清热解毒类中药,如金银花，连翘，板蓝根，大青叶，鱼腥草，黄芩，黄连等，目前已经研究比较清楚的成分主要有两类:一是多酚类物质,不仅可抑制流感病毒蛋白质和合成,同时也可抑制流感病毒的吸附作用;另一类是黄酮类物质其能抑制流感病毒唾液酸酶的活性和抑制膜融合作用［１］。而另一类中药可通过调节机体免疫发挥间接抗流感病毒作用，如黄芪，人参等。

    金银花重要的药理成分主要有绿原酸、异绿原酸、黄酮化合物、芳樟醇和双花醇等。马丙祥等［２］进行的双花(金银花)喷雾剂体内抗病毒实验表明,其大、小剂量对小鼠流感病毒性肺炎有抑制作用,而大剂量作用更为显著。

    连翘，其种子挥发油乳剂鸡胚内和鸡胚外进行抗亚洲甲型流感病毒作用试验,结果表明，其对京科68-1株病毒在感染同时给药显示作用,对仙台株病毒感染同时给药和感染前给药均能显示作用。研究发现苯乙醇苷类、黄酮类及木脂素类成分是连翘抗流感病毒作用的主要物质基础。

    黄芩中提取的黄酮类化合物通过抑制内涵体/溶酶体膜的融合，能减少流感病毒感染小鼠的病毒复制；当黄芩黄酮类加到流感病毒感染的犬肾(MDCK)细胞时，能减少病毒的释放。

    板蓝根在临床上常用于流感等疾病的防治。有学者运用鸡胚培养法分别检测了15种种质的板蓝根对甲型流感病毒的抑制作用,血凝滴度测定结果表明,在对甲型流感病毒的直接作用、治疗作用和预防作用上板蓝根的有效率分别为100%(15/15)、60%(9/15)、67%(10/15)。

    鱼腥草具有广谱抗菌、抗病毒作用。李氏等将鱼腥草的提取物进行体外抗病毒实验,结果显示:鱼腥草挥发油对甲、乙型流感病毒均呈现一定的抑制效果,并且是通过破坏病毒包膜而抑制、杀伤流感病毒的。鱼腥草还能通过提高外周血中性粒细胞和单核细胞的活性而发挥抗病毒的作用。

    Utstmomiya 等［３］报道，甘草皂甙对于流感病毒感染小鼠，可提高小鼠生存率，延长小鼠生存时间，降低肺病毒滴度；但体外实验，甘草皂甙对于病毒生存和复制无影响；从甘草皂甙治疗的病毒感染小鼠体内分离脾T细胞，转输给病毒感染鼠，也可增加生存率；当甘草皂甙与抗 IFN-γ 单克隆抗体同用时，则不显示抗病毒作用；结果提示甘草皂甙保护小鼠病毒感染，是通过刺激 T 细胞产生 IFN-γ。

    李丽娅等［４］研究报道,黄芪多糖溶液100g/l浓度,小白鼠滴鼻给药,对流感病毒引起的小白鼠肺炎实变有明显的抑制作用,200g/l、100g/l浓度组能抑制流感病毒增殖(与病毒对照组比较P<0.05或P<0.01),200g/l浓度组能延长流感病毒感染的小鼠生存时间。并分析了黄芪抗流感病毒的作用机制可能是通过诱导干扰素、NK细胞活性,从而杀灭部分病毒。其他还有如柴胡，大青叶，贯仲等均具有一定的抗流感病毒作用。

    2  具有抗流感病毒作用的中药复方

    Kobayashi 等［５］研究表明，银翘散及其组分甘草、牛蒡子的提取物，治疗流感病毒感染小鼠，均能使生存时间延长、生存率提高，说明银翘散有抗流感病毒作用。

    欧敏等［６］，用Balb/c纯系小鼠复制呼吸道流感病毒感染模型，观察清肺饮对NK细胞活性、IL-2含量、干扰素诱生及T 细胞亚群的影响，结果显示 IFN-γ、IL-2、NK 细胞活性之间存在直线相关关系：清肺饮能增强NK细胞活力、提高IL-2活性、诱生IFN-γ，还能提高CD3+、CD4+、CD4+/CD8+、降低CD8+，说明清肺饮能提高小鼠细胞免疫状态，具有重要的免疫启动和免疫调节作用，对流感病毒感染小鼠免疫功能抑制状态或低下状态起到激发作用。

    Ball等［７］报告，用桂枝二越婢一汤治疗流感病毒感染小鼠，可明显提高生存率，延长生存时间;降低肺指数、病毒滴度、血细胞凝集抑制反应滴度等；并能诱导IFN的产生，从而产生抗病毒作用。

    小柴胡汤是和解少阳的代表方剂,小柴胡汤加减方由柴胡、黄芩、法半夏、板蓝根、甘草等组成。研究发现，小柴胡汤加减方在浓度为200 mg/ml时能保护鸡胚，对流感病毒增殖有较强的抑制作用，在浓度为100 mg/ml时保护鸡胚的作用明显。小柴胡汤在浓度为200mg/ml时对流感病毒增殖无抑制作用，但能保护鸡胚。这表明小柴胡汤及其加减方均有抗流感病毒作用，但小柴胡汤加减方的作用比原方明显［８］。

    麻杏石甘汤及其加味方能通过调节细胞因子的分泌、调节T细胞亚群百分率而调节机体免疫功能，从而起到抗流感病毒作用［９］。另外，还有如小青龙汤，蒿芩清胆汤，升降散，葛根汤等可抗流感病毒的报道。

    3  中医药抗流感病毒主要机制

    3.1  抑制流感病毒复制及直接杀伤病毒作用      病毒进入细胞后，在 4～6h 内复制、释放出大量感染性病毒感染邻近细胞，引起进行性感染。病毒能否在细胞内复制是决定感染与发病的重要因素，药物能否抑制机体内病毒复制过程是衡量抗病毒药物疗效的主要指标之一。实验研究表明，具有直接抗病毒作用的单味中药大多数为清热解毒类中药，其中多数含黄酮类或类黄酮类物质，该物质可抑制流感病毒唾液酸酶活性及膜融合作用，如连翘、金银花、野菊花、黄连、黄芩、大青叶、鱼腥草、柴胡、牛蒡子等。同时实验证明，许多中药复方药物具有抑制病毒复制及直接杀灭病毒作用。

    3.2  抑制流感病毒引起的组织细胞凋亡      孙氏等发现，穿琥宁可抑制流感病毒诱导狗肾传代细胞凋亡，发挥保护宿主细胞作用。中药通过抑制流感病毒感染的宿主细胞的凋亡，而减轻免疫损伤，保持呼吸道黏膜的完整性，发挥机体保护作用。

    3.3  增强巨噬细胞的吞噬作用和 NK细胞的杀伤作用      陈志敏等［１０］研究穿孔素缺陷对小鼠流感病毒感染及其免疫功能的影响，结果发现穿孔素缺陷小鼠杀伤(NK)细胞毒活性缺失、细胞毒T细胞(CTL)活性降低、病毒清除时间延长。研究表明，具有间接抗病毒作用的单味中药主要通过调节机体的免疫功能而达到间接抗流感病毒作用，如黄芪，人参等。

    3.4  调节细胞因子的分泌      欧敏等［１１］观察清肺饮对36例呼吸道病毒感染的疗效，发现经清肺饮后，血浆中 NK 细胞活性，IFN-γ, IL-2水平提高。

    3.5对肺组织中热休克蛋白（ＨＳＰ）表达的影响      杨钦河等［１２］通过对实验性流感病毒肺炎小鼠肺组织中HSP 70的定量观察，探讨中药咳宁方对流感病毒肺炎小鼠肺组织的保护作用及其与HSP 70表达的关系，结果显示，模型组HSP 70表达较正常组织明显高，表明流感病毒能够刺激小鼠肺组织HSP 70的表达显著增加，使机体自身产生应激性保护反应。

    综上所述，中医药治疗流感病毒感染，不单纯着眼于直接的抗病毒作用，而是重视流感病毒－机体－中药三者的关系；不仅是以清除体内病原体为目的，而是通过改善机体状态，调动机体抗病力量。中医药治疗虽然是非特异性为主的，但因重视体质因素，强调辨证，而具有更广泛的适应性。因此，针对流感病毒感染的疾病过程和机体状态，产生了同病异治的多个方剂，同时中药复方也更能体现中医药注重整体观和强调辨证论治的特点。随着实验技术的应用，中药抗病毒机制的研究将不断深入和完善，有利于丰富病毒致病机制的探寻，了解药物抗病毒机制，更好地指导临床应用。

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  1 庞浩龙,李站立,贡联兵.中西药抗流感病毒研究概况. 中华临床医药杂志,2004,5(1):84.

2 马丙祥,段晓颖,王志超,等.双花喷雾剂治疗小儿上呼吸道感染临床与实验研究.中西医结合杂志,2000,20(9):655.

3 Utstmomiya T，Kobayashi M, Pollard RB, et al. Glycyrrhizin, an active component of licoriceroots, reduces morbidity and mortality of mice infected with lethal doses of influenza virus.AntimicrobAgents Chemother, 1997, 41(3): 551-556.

4 李丽娅,凌秋,崔洪波,等.黄芪多糖抗流感病毒的试验研究.中国中医药科技,2002,9(6):354.

5 Kobayashi M, Davis SM, Utsunomiya T, et al. Antiviral effect of gingyo-san, a traditional Chinese herbal medicine, on influenza A2 virus infection in mice. Am J Chin Med,1999, 27 (1):53～62.

6 欧敏, 董建华. 清肺饮对流感病毒感染小鼠免疫功能的调节作用. 北京中医药大学学报,1998, 21(6): 19～21.

7 Ball MA, Utsunomiya T, Ikemoto K，et al. The antiviral effect of keishi-ni-eppi-ichi-to, a traditional Chinese herbal nedicine, on influenza A2(H2N2) virus infection in mice. Experientia, 1994, 50(8): 774～779.

8 袁长津，卢芳国，朱应武. 小柴胡汤及其加减方体外抗流感病毒的实验研究.中华中医药杂志，2006,21(1):41～42.

9 卢芳国，田道法，朱应武，等. 麻杏甘石汤加味方对A型流感病毒感染小鼠免疫功能的影响.中医药学报，2005 , 33 (2):36～37.

10 陈志敏，邵洁，张群卫，等. 穿孔素缺陷小鼠对流感病毒感染及其免疫功能的影响. 中华微生物学和免疫学杂志，2002,22(1):49～52.

11 欧敏，杜怀棠，段蕴铀 . 清肺饮对呼吸道病毒感染及其对 NK、IFN-γ, IL-2的影响. 北京中医药大学学报,2002,25(4):56～58.

12 杨钦河，唐雪春，陈孝银，等 . 咳宁方对流感病毒性肺炎小鼠肺组织HSP 70表达的影响. 中国病理生理杂志，2004,20(6):1062～1065.