紫外分光光度法测定紫云英蜜中总酚的含量

                  作者：张赛群 梁妍 杨杰 彭佼 朱洁

【摘要】  目的：建立紫云英蜜中总酚含量测定方法。方法：采用Folin?酚法，样品经福林试剂显色反应后，紫外?可见分光光度计测定其总酚含量。结果：总酚在2.03～8.04 μg·mL-1内线性良好，r=0.9997，且平均回收率为102.42%，RSD=2.64%(n=5)。结论：该方法准确，简便，重现性好，专属性强，可有效地控制紫云英蜜的质量。

【关键词】  肖公蜜 总酚 Folin?酚法 紫外分光光度法

　Abstract  Objective ：To establish a UV method for determination of the content of total hydroxybenzene for Ziyunyingmi. Method： Folin?Denis was adopted of determining the content of total hydroxybenzene by UV.Result：The total hydroxybenzene showed a good linear relationship at 2.03～8.04 μg·mL-1，r=0.9997，the average recovery was 102.42 %, RSD =2.64 %(n=5). Conclusions： The method is accurate and simple with good reproducibility, and can control the quality of this preparation effectively.
   
　　Key words   ziyunyingmi；total hydroxybenzene；Folin?Denis；UV

　　紫云英蜜又名红花草蜜或草子蜜，具有大清新宜人的草香味，甜而不腻，鲜洁清甜，色泽为浅琥珀色。富含多糖、多酚、氨基酸、维生素、微量元素等多种营养成分，长期饮用可补气血，健脾胃，增强抗病能力，强身健体。且其中的多酚酸具有抗病原微生物、抗炎症、抗变态反应、抗心血管疾病和抗氧化等作用［1，2］。为了控制产品质量，我们采用Folin?酚法对贵州不同产地的紫云英蜜中总多酚含量进行了研究。

　　1  仪器与试药

　　1.1  仪器

    紫外可见分光光度计（岛津?2401）;超声波清洗仪（昆山市超声仪器有限公司KQ?2508型）;恒温水浴锅（余姚市亚星仪器仪表有限公司）。

　　1.2  试药

    原儿茶酸对照品（批号：110809?200503）；钨酸钠，磷钼酸，85%磷酸，Na2CO3，以上试剂均为分析纯；水为蒸馏水；

　　1.3  福林试剂的配制［3］：

    称取钨酸钠40 g，磷钼酸8 g和85%磷酸20 mL，溶于300 ml蒸馏水，煮沸加热回流2 h，冷却，稀释至400 mL，置于棕色瓶中保存。

　　1.4  Na2CO3溶液的配制

    称取15 g Na2CO3，溶于200 mL蒸馏水中，即为75 g·L-1Na2CO3溶液。

　　2  方法与结果

　　2.1  对照品溶液的制备

    原儿茶酸对照品的配制：称取原儿茶酸对照品15.80 mg于50 mL容量瓶中，蒸馏水溶解并定容，摇匀，备用，浓度为316 μg·mL-1。

　　2.2  供试品溶液的制备

    取同一批样品，精密称定，置于50 mL容量瓶中，超声使溶，过滤，取20 mL续滤液定容成50 mL，摇匀，备用。

　　2.3  测定方法

    精密吸取适量样品溶液1 mL于10 mL带塞离心管中，加入2.5 mL福林试剂，放置5 min，再精密加入Na2CO3溶液2mL，50℃水浴保持5 min，再取出室温放置2 h，于760 nm左右测定吸光度值。

　　2.4  标准曲线的制备

    从原儿茶酸标准储备液中分别吸取1，1.5，2，2.5，3，3.5 mL于25 mL容量瓶中，蒸馏水稀释定容，摇匀，浓度分别为12.64 μg·mL-1 ，18.96 μg·mL-1，25.28 μg·mL-1，31.60 μg·mL-1，37.92 μg·mL-1，44.24 μg·mL-1，分别从中精密吸取1 mL，按2.3 测定方法反应，测定吸光度值。以终浓度为横坐标，吸光度值为纵坐标，得回归方程为Y=0.0932X- 0.0315，r=0.9997。结果表明总酚在12.64 μg·mL-1～44.24 μg·mL-1范围内线性良好。

　　2.5  精密度试验

    取同一份对照品按上述反应后连续测定5次，吸光度值RSD=0.386%。结果表明仪器精密度良好。

　　2.6  样品吸光度值稳定性试验

    按2.2供试品溶液制备方法制备样品液，并按2.3测定方法反应后，每隔5 min测定一次，观察吸光度值变化，结果1h内的吸光度值RSD=1.42%，结果见图1。结果表明样品显色后在1 h内较稳定。

　　2.7  重现性试验

    取同一批样品，平行5份，精密称定，按供试品溶液法制备，并按2.3测定法反应。结果表明，样品的平均含量为2.154 mg·g-1，RSD=3.43%。结果表明方法重现性良好。

　　2.8  加样回收率试验

    取同一批样品，精密称定，精密加入337 μg·mL-1原儿茶酸对照品2 mL，按供试品溶液法操作，并按2.3测定样品中总酚的含量，结果表明，其回收率为102.42%，RSD=2.64%，数据见表1。表1  总酚加样回收率试验结果（、略）
 
　　2.9  样品含量测定

    分别精密称取贵州不同产地的样品，每批平行取5份，按2.3测定方法操作，测定每批样品中总酚平均含量。结果见表2。表2  不同批次样品总酚含量（略）

　　3  讨论

    植物多酚的测定方法有多种［3，4］，曾考察普鲁士蓝法［5］、重氮比色法［6］等，均因为方法显色不稳定或方法步骤复杂而未采用。而Folin?酚法实验操作较简单，且结果稳定可靠，故选用该方法作为紫云英蜜中总酚含量测定方法。

【】
  　　1 徐铮奎. 植物多酚——有待开发的医药新产品“金矿”. 制药信息，2003，19（8）：15～17.

　　2 曹炜，索志荣. Folin?Ciocalteu比色法测定蜂蜜中总酚酸的含量. 食品与发酵，29（12）：80～82.

　　3 石碧， 狄莹. 植物多酚. 北京：出版社，2000：19～21.

　　4 田文礼，孙丽萍，董捷，等. Folin?Ciocalteu比色法测定蜂花粉中的总酚. 食品科学，2007，28（2）：258～260.

　　5 刘清，李俊清，廖蓉苏. 普鲁士兰法测定胡杨中植物多酚含量. 林业科技开发，2007，21（2）：42～44.

　　6 李楠， 秦学孔， 彭辉. 茶多酚含量重氮化?偶合分光光度法测定. 大连理工大学学报，2000，40（4）：425～427.