回流法与超声法对清脂颗粒有效成分提取比较研究
【摘要】 目的: 比较不同方法对清脂颗粒中有效成分进行提取，筛选最佳条件。方法: 采用正交设计实验法，以高效液相色谱（HPLC）法测定有效成分含量，比较提取率。结果: 清脂颗粒中有效成分的最佳提取条件超声法为加6倍量的80％的乙醇，提取3次，每次提取30min。结论: 所确定的提取条件稳定可行。
【关键词】 提取 正交设计 清脂颗粒 有效成分
清脂颗粒是由制首乌、决明子、山楂等药配伍而成，用于痰浊阻滞型高脂血症。本实验研究是根据处方中药材所含有效成分的性质，通过回流法和超声法进行提取，确定清脂颗粒中的乙醇提取条件。分别采用正交实验探讨乙醇倍数、提取时间、提取次数和加醇含量作为考察因素，以2，3，5，4'-四羟基二苯乙烯-2-O-B-D-葡萄苷，大黄素，熊果酸含量为检测指标，对两个方法进行比较，报告如下。
1 仪器与对照品
1.1 主要仪器
LC-10AT型液相色谱仪泵主机（日本岛津）；SPD-10A型紫外检测器（日本岛津）；N-2000色谱工作站（浙江大学智达公司）；万分之一天平（美国PE公司）；SB2200-T型超声波清洗器（上海奥特赛恩斯仪器公司）。
1.2 对照品
大黄素对照品，110756-200110；2，3，5，4'-四羟基二苯乙烯-2-O-B-D-葡萄糖苷，110844-200404；熊果酸，110742-200527。均购于药品生物制品检定所。
2 实验部分
2.1 正交实验设计
优选提取工艺条件，按每份试验1日用量称取制首乌、决明子、山楂等药材以L9（34）正交表率选，每方法共试验9份。
其因素水平安排见表1，结果见表2。
表1 清脂颗粒剂提取工艺因素水平表（略）
2.2 有效成分指标含量测定［3，4］
2.2.1 2，3，5，4'-四羟基二苯乙烯-2-O-B-D-葡萄苷
色谱条件和系统适应性实验：以十八烷基键合硅胶为填充剂，以乙腈-水（13:87）为流动相，检测波长为320nm。理论踏板数以葡萄苷峰计应不低于2000。
对照品溶液的制备：精密称取葡萄苷对照品适量，加稀乙醇制成每1ml含0.2mg的溶液，即得。
供试品的制备：取本品粉末约0.5g，精密称定，具塞锥型瓶中，精密加入稀乙醇10ml，称定重量，超声30min，放冷，再称定重量，用稀乙醇补足减失重量，滤过，取上清液，即得。
测量法：精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
本品按照干燥品，含2，3，5，4'-四羟基二苯乙烯-2-O-B-D-葡萄苷（C2OH22O9）不得少于0.70％。
2.2.2 大黄酚，大黄素
色谱条件和系统适应性实验：以十八烷基键合硅胶为填充剂，以甲醇-0.1％磷酸溶液（85：15）为流动相，检测波长254nm。理论踏板数以大黄素,大黄酚峰计应不低于3000。
对照品溶液的制备：精密称取大黄酚，大黄素对照品，加甲醇制成每1ml含20μg的溶液，即得。
供试品的制备：取本品粉末（过三号筛）约1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加甲醇10ml，称定重量，超声处理30min，放冷再称定重量，用甲醇补足减失重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
测定法：分别吸取对照品溶液和供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
2.2.3 熊果酸［5，6］
色谱条件和系统适应性实验：以十八烷基键合硅胶为填充剂，以乙腈-水-磷酸溶液（85：14.95：0.05）为流动相，检测波长210nm。理论踏板数以熊果酸峰计应不低于3000。
对照品溶液的制备：精密称取熊果酸对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，即得。
供试品的制备：取本品粉末（过三号筛）约1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加甲醇10ml，称定重量，超声处理30min，放冷再称定重量，用甲醇补足减失重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
测定法：分别吸取对照品溶液和供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
2.3 方差分析
根据表2，3的结果，将三指标含量之和作为综合含量进行方差分析。
表2 回流提取2，3，5，4'-四羟基二苯乙烯-2-O-B-D-葡萄苷、大黄素、熊果酸含量测定正交实验设计与结果L9（34）（略）
表3 超声提取2，3，5，4'-四羟基二苯乙烯-2-O-B-D-葡萄苷、大黄素、熊果酸含量测定正交实验设计与结果L9（34）（略）
2.4 工艺条件的确定
从方差分析结果可知，清脂颗粒制首乌、决明子、山楂的醇提条件中，提取方法、乙醇倍数、提取时间均无显著差异（P>0.05），提取次数和乙醇浓度具有显著性差异（P<0.05），各因素的作用的主次为乙醇浓度>提取次数>提取倍数>提取方法>提取时间，较适宜的因素为：乙醇浓度2提取次数3提取倍数2提取时间1。
3 讨论
中药有效成分的提取是指从原料药材中分离有效成分的操作，其直接关系到中药有效成分的得率和后续加工的难易程度。传统的提取方法主要有溶剂提取法、水蒸气蒸馏法两种。溶剂提取法又分为浸渍法、渗滤法、煎煮法、回流提取法以及连续提取法等。这些传统的方法普遍存在着提取率不高、杂质消除率低、能耗高、生产周期长等缺点。近年来，一些新的技术，如超声场强化、超临界流体萃取、微波辅助提取技术、破碎提取法、空气爆破提取法、荷电提取法、旋流提取法等被广泛应用于中药有效成分的提取过程中。
通过比较提取方法，回流法和超声法没有显著性差异，根据节省能源、降低成本的前提，选择超声法为本颗粒提取方法。本实验结果表明，清脂颗粒中制首乌、决明子、山楂的最佳提取条件为6倍量的80％乙醇，提取3次，每次30min。
用超声法提取中药有效成分，方便快捷，提取率比传统的回流方法高，但真正的化生产还有待深入探讨。
【】
1 谢伟，谢绍辉，张爱红.安神补心颗粒醇提工艺研究.广东药学，2005，15（3）：28～30.
2 许小军，田更河，冯洪江，等.通脉活络康颗粒的制备及质量控制.药学杂志，2006，26（3）：336～337.
3 国家药典委员会编.中华人民共和国药典(一部).2005年版.北京:化学工业出版社，2005，附录6：31.
4 龚尧峰，高尚，易志恒，等.清热解毒颗粒的质量标准研究.中国药房，2006，17(2)：1～2.
5 雍德卿，主编.新编医院制剂技术.第2版.北京：人民卫生出版社，2004，651.
6 陈发奎，主编.常用中药有效成分含量测定.第1版.北京:人民卫生出版社，1997，348～350.
