两种比色法测定何首乌中游离蒽醌含量的比较

［摘要］ ［目的］ 选择测定何首乌中游离蒽醌含量的方法. ［方法］ 精密称定何首乌药材适量，氯仿超声萃取，取部分溶液蒸干，残渣分别用混合碱比色法和醋酸镁比色法进行测定. ［结果］ 醋酸镁比色法的测定值在16h内稳定，RSD为0.87%，平均回收率为99.37%±1.35%，同一样品5次测定的RSD为1.02%;混合碱比色法16h时的RSD为2.83%，平均回收率为96.72%±1.57%，同一样品5次测定的RSD为4.86%. ［结论］ 醋酸镁比色法适用于何首乌中游离蒽醌含量的测定，且具有稳定、准确及重现性好等特点.

    ［关键词］  比色法;质量控制;植物，药用

     Comparison of content of anthraquinone in the Radix Polygoni

    ABSTRACT:OBJECTIVE To select the spectrophotometric method for determining the content of anthraquinone in the Radix Polygoni Multiflori.METHODS The proper Radix Polygoni Multiflori powder was weighted accurately，and then the anthraquinone content was collected by ultrasonic with chloroform.Part of collected liquid was evaporated and the remainder was measured by mixed alkali and magnesium acetate methanol colorinetry spectrophotometric method.RESULTS The data of magnesium acetate-methanol colorinetry pectrophotometric method was stable in16h（the RSD was0.87%），recovery was99.37%±1.35%，RSD was1.02%when the same sample was measured in5times，the data of mixed alkali colorinetry spectrophotometric method was2.83%，96.72%±1.57%，4.86%in turn.CONCLUSION The magnesiumacetate-methanol colorinetry spectrophotometric method is propitious to detect the content of anthraquinone in the Radix Polygoni Multiflori and has characteristics of stable，accurate and recurrence.Key words:colorimetry;quality control;plants，medicinal

    何首乌（Polygonum multiflorum Thunb.）为蓼科植物何首乌的干燥块根，使用时有生用及制用之别.生用何首乌具有润肠、解毒及截疟之功，但有一定的毒性;制用何首乌具有补肝肾、益精血、壮筋骨、乌发延缓和泻下等功效，且毒性较低 ［1，2］ .目前直接测定何首乌中总游离蒽醌含量的方法有氢氧化钠-氨水比色法（混合碱比色法）和醋酸镁比色法，本文对两种方法进行了系统的方法学比较，为何首乌的炮制工艺及其制剂的质量控制提供方法学依据.

　　1 材料

    实验所用仪器有UV-2001型紫外分光光度计（日本Shimadzu）、Finnpiete1000型微量取样器、AS3120型超声波清洗器（奥特赛思仪器有限公司）、BS233S型天平及电子恒温水浴锅.所用试药有1，8-二羟基蒽醌（批号为0829-9702，由药品生物制品检定所提供）、醋酸镁（北京化工厂）、氯仿（北京化工厂）及甲醇（沈阳市东兴试剂厂）等，均为分析纯.药材何首乌由吉林敖东药业股份有限公司提供，炮制方法:取净何首乌置于不锈钢浸润槽内，将黑豆汁均匀浇洒于何首乌表面，每30min搅拌1次，待汁液吸尽，密闭，润制12h，加热蒸制0，4，8，10h，取出放凉，低温干燥，放入洁净塑料囊内，密 闭，即得.

    2 方法与结果

    2.1 线性关系  精密称取1，8-二羟基蒽醌标准品5mg，置于25mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，作为标准溶液.精密吸取标准溶液0.2，0.4，0.6，0.8，1.0mL，各2份，分别置于10mL容量瓶中，水浴蒸干，放冷，得残渣，分别按下述方法比色. 混合碱比色法:用50g/L氢氧化钠-20g/L氨水溶液溶解并稀释至刻度，以它为空白在520nm处测定吸光度 ［3］ ;醋酸镁比色法:用35mmol/L醋酸镁-甲 醇溶液溶解并稀释至刻度，以它为空白在510nm处测定吸光度 ［4］ .分别以两种方法比色结果的吸光度Y为纵坐标、浓度X（mg/L）为横坐标绘制标准曲线，回归方程.混合碱比色法回归方程:Y=0.0511X-0.0099，r=0.9997;醋酸镁比色 法回归方程:Y=0.0477X-0.0152，r=0.9999.表明两种方法均在4～20μg范围内呈良好的线性关系.

    2.2 精密度实验  取2份标准溶液各0.6mL，分别用混合碱比色法及醋酸镁比色法重复测定吸光度5次，计算样品中游离蒽醌的含量，结果示混合碱比色法的RSD为0.20%，醋酸镁比色法的RSD为0.18%.

    2.3 重复性实验  精密称取同一个何首乌样品（过 60目筛）0.5g共10份，分别置于50mL容量瓶中，加入约40mL氯仿，超声40min，放冷，氯仿定容，过滤.精密量取滤过液8mL置于10mL容量瓶中，水浴蒸干，放冷，得残渣.将其中5份残渣用混合碱比色法，另5份用醋酸镁比色法进行测定，计算样品中游离蒽醌含量，结果示混合碱比色法的RSD为4.86%，醋酸镁比色法的RSD为1.02%.

    2.4 稳定性实验  精密称取2份同一个何首乌样 品（过60目筛）各0.5g，分别置于50mL容量瓶中，加入约40mL氯仿，超声40min，放冷，氯仿定容，过滤.精密量取滤过液8mL置于10mL容量瓶中，水浴蒸干，放冷，得残渣.将2份残渣分别用混合碱比色法和醋酸镁比色法于0，2，4，8，16h测定吸光度，样品中游离蒽醌含量，结果见表1. 表1 稳定性实验结果

    2.5 加样回收率实验  取已知游离蒽醌含量的何首乌样品适量共10份，分别置于50mL容量瓶中，加入1mL标准溶液，再加入约40mL氯仿，超声40min，放冷，氯仿定容，过滤.精密量取滤过液8mL置于10mL容量瓶中，水浴蒸干，放冷，得残渣.将其中5份残渣用混合碱比色法，另5份用醋酸镁比色法进行测定，结果见表2.

    2.6 样品的测定  精密称取何首乌样品（过60目筛）0.5g共6份，分别置于50mL容量瓶中，加入约40mL氯仿，超声40min，放冷，氯仿定容，过滤.精密量取滤过液8mL置于10mL容量瓶中，水浴蒸干，放冷，得残渣.将残渣分别用混合碱比色法和醋酸镁比色法进行测定，计算样品中游离蒽醌含量，结果见表3. 表2 加样回收率实验结果

    3 讨论

    本实验结果表明，测定何首乌中游离蒽醌时，醋酸镁比色法比混合碱比色法具有更好的重现性、稳定性及准确性，且灵敏度更高，加之使用混合碱比色法时使用的氨试液及氢氧化钠均对皮肤具有刺激作用，故认为醋酸镁比色法更适用于何首乌中游离蒽醌的含量测定.据报道，醋酸镁比色法的最适测定吸收波长为512nm  ［5］ ，而混合碱比色法为535nm  ［3］ .本实验利用紫外分光光度计扫描结果示，1，8-二羟基蒽醌在35mmol/L醋酸镁-甲醇溶液和50g/L氢氧化钠-20g/L氨水溶液中的最大吸收波长分别为510，520nm，故本实验分别选择510，520nm作为测定波长.为了避免因游离蒽醌受热不稳定而影响测定结果 ［6］ ，采用了低于80℃条件的水浴进行氯仿溶剂蒸发的方法.总之，醋酸镁比色法适用于何首乌中游离蒽醌含量的测定，且具有稳定、准确及重现性好等特点.

　　 ［参 考 文 献］

    ［1］ 刘黎明，苏玮，郭群.何首乌的药理研究概况［J］.中草药 ，1997，28（2）:119.

    ［2］ 赖荣汉，刘晓文，王毅兵.何首乌炮制沿革与现代研究［J］. 中医药信息杂志 ，1999，6（9）:19.

    ［3］ 冯立彬，杨婷婷，赵丽芬，等.何首乌最佳炮制工艺的研究［J］. 中医药信息 ，1998（1）:11.

    ［4］ 陈小蕾，吴立强，陈小雨，等.不同溶剂所制何首乌浸膏 中所含游离蒽醌的含量比较［J］. 海南医学 ，2003，14（12）:119.

    ［5］ 薛永梅，马莎，郎雪松，等.云南不同产地何首乌中蒽醌 的含量测定［J］. 云南中医学院学报 ，2004，27（1）:42.

    ［6］ 苏于仁，周华，刘中秋，等.大黄在提取精制过程中的化学成分变化研究（1）―大黄素的湿热分解机理探讨［J］. 药物分析杂志 ，1998，18（2）:82.