金银花中3种成分含量的超高速液相色谱法同时测定

　　2.3 供试品溶液的制备取本品细粉(过4号筛)约3 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70%乙醇50 ml，称定重量，超声处理(功率250 W，频率33 kHz)30 min，放冷，再称定重量，用70%乙醇补足减失的重量，摇匀，经0.45 μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。供试品色谱图见图4。

　　2.4 线性关系分别吸取对照品溶液Ⅱ1，2，5，10 μl，对照品溶液Ⅰ5，10 μl注入液相色谱仪中，测定色谱峰面积，测定结果回归处理。木犀草苷回归方程为： Y= 2.918×105X+3.020×104，r=0.999 9，木犀草苷进样量在0.021 48～1.074 μg范围内线性关系良好;金丝桃苷回归方程为：Y= 3.122×105X+3.329×104，r=0.999 9，金丝桃苷进样量在0.020 48～1.024 μg范围内线性关系良好;绿原酸回归方程为：Y= 8.347×105X+2.158×104，r=0.999 6，绿原酸进样量在0.202 1～10.104 μg范围内线性关系良好。图4 金银花样品UFLC图谱

　　2.5 稳定性实验精密吸取同一供试品溶液，在0，2，4，6，8，12 h分别进样10 μl，测定，木犀草苷、金丝桃苷和绿原酸峰面积的RSD分别为0.56%，0.32%，1.28%。结果表明，供试品溶液中的木犀草苷、金丝桃苷和绿原酸在室温放置12 h内基本稳定。

　　2.6 精密度实验精密吸取同一供试品溶液，连续进样6次，10 μl/次，木犀草苷、金丝桃苷和绿原酸峰面积的RSD分别为0.69%， 0.42%，0.56%。结果表明，其精密度良好。

　　2.7 重复性实验取同一批金银花样品研细，取约3 g，精密称定，共取6份，按“2.3”项下方法制备供试品溶液，按上述色谱条件分别进样10 μl，结果供试品中的木犀草苷、金丝桃苷和绿原酸含量的RSD分别为1.05%，0.78%，1.42%，表明其重复性良好。

　　2.8 回收率实验取重复性实验同批金银花样品，研细，取约1.5 g，精密称定，共取6份，分别加入对照品混合溶液Ⅰ10 ml，绿原酸对照品溶液(1.023 mg/ml)15 ml，按“2.3”项下方法制备供实品溶液，按上述色谱条件分别进样10 μl，结果供试品中的木犀草苷、金丝桃苷和绿原酸的平均加样回收率分别为98.45%(RSD=1.21%)，96.77%(RSD=0.56%)，99.12%( RSD=0.87%)，表明其回收率良好。

　　2.9 样品含量测定结果取12批供试品，按“2.3”项下操作，在上述色谱条件下进样分析。结果见表2。表2 样品含量测定结果

　　3 讨论

　　UFLC相比传统的HPLC可以达到快速分离，缩短时间约82%，节约分析时间，节约分析溶剂。UFLC所用色谱柱比传统ODS色谱柱粒径小，分离机制与传统色谱柱不尽相同，导致金银花各成分出峰顺序与传统方法不尽相同。

【参考文献】
  　[1] 国家药典委员会.中国药典，Ⅰ部[S].北京:化学工业出版社，2005.

　　[2] 刘高峰，孙考祥，黄丽君，等.HPLC法测定不同生长期金银花中绿原酸含量[J].中医药学报，2001,29(6):51.

　　[3] 李 丽，田义杰，毛崇武，等.RP-HPLC测定金银花3种成分的含量[J].中成药，2008，30(1)：134.