正交试验法优化香附总黄酮提取工艺
2.4线性关系考察
分别精密量取芦丁对照品溶液0.2、0.5、1.0、1.5、2.0 mL置25 mL容量瓶中，按照“2.3”项下自“加入5%(质量浓度)NaNO2 溶液0.3 mL ”起进行操作，于500 nm处测定其吸光度。以吸光度(A)为纵坐标，芦丁质量浓度(ρ)为横坐标进行线性回归，得回归方程为A=27.455ρ+0.018 7，r=0999 0。结果表明芦丁对照品的质量浓度在0.040 16～0401 6 mg·mL-1范围内与吸光度呈良好的线性关系。
2.5单因素考察
以乙醇体积分数、料液比、提取时间为考察因素，考察其对总黄酮提取率的影响。结果见图1。[PSa6381〗A.乙醇体积分数;B.料液比;C.提取时间图13个因素对总黄酮提取率的影响Figure 1The effect on the extraction yield of 3 factors由图1可知，乙醇体积分数在80%时香附总黄酮提取率最高，当乙醇体积分数继续提高，总黄酮提取率反而下降;总黄酮提取率随着料液比的增大而升高，当料液比为1∶15时达到最大值;提取时间为40 min时总黄酮提取率最高。
2.6正交试验
在单因素考察的基础上，选择乙醇体积分数(A)、料液比(B)、提取时间(C)、提取次数(D) 4个因素为考察因素，以总黄酮提取率为指标，采用L9(34)正交试验表安排试验，确定香附总黄酮的最佳提取工艺。结果见表1-3。由表2、3可知，各个因素对香附总黄酮提取率影响程度从大到小依次为：乙醇体积分数>提取次数>提取时间>料液比，4个因素对提取率的影响均无统计学意义。结合实际生产的需要，选择最佳提取工艺条件为A1B2C2D2，即乙醇体积分数70%，料液比为1∶15，提取时间为45 min，提取2次。表1因素水平表表2正交试验结果与直观分析表3正交试验方差分析表
2.7验证试验
分别取3份同一产地香附粉末，精密称定，按上述确定的最佳工艺进行提取，测定总黄酮提取率。结果表明，3份香附总黄酮平均提取率为 0.352 15%，RSD=2.11%，表明该提取工艺合理、稳定。
3讨论
3.1在试验中尝试把样品用石油醚脱脂后直接将醇提液进行显色后再扫描，结果提取液在500 nm处并无最大吸收，可能是其他成分对黄酮测定干扰较大所致。而用聚酰胺富集纯化香附总黄酮类物质后其乙醇洗脱液经扫描，最大吸收波长为500 nm，与芦丁显色后的最大吸收波长一致。
3.2在考察聚酰胺柱洗脱溶剂时，采用了水、体积分数分别为20%、40%、60%、70%、80%的乙醇液进行洗脱，测定各洗脱液中总黄酮含量。结果表明用60%(体积分数)乙醇洗脱时总黄酮含量最高，体积分数为70%和80%乙醇的洗脱液中几乎检测不到总黄酮，故选择的洗脱程序为：先用100 mL 水洗去无机盐离子，再用20%(体积分数)乙醇50 mL洗去酚类成分，最后用60%(体积分数)乙醇300 mL进行洗脱，收集60%(体积分数)乙醇洗脱液。
3.3正交试验结果提示，本次试验所考察各因素对提取率的影响均无统计学意义，推测与各因素选择范围过窄有关。可否进一步降低乙醇体积分数或(和)延长提取时间，以使香附总黄酮被最大限度地提取出来，尚需继续开展实验研究，从而保证最终确定的提取工艺的实用性和科学性。
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