高效液相色谱法测定橘核中橙皮苷的含量
作者：汪金玉，陈康，徐小飞，张淑芬
【摘要】 目的建立橘核中橙皮苷含量的测定方法，为橘核的质量评价与控制提供科学依据。方法 采用HPLC法进行测定。色谱柱：Kromasil C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5 μm);流动相：甲醇-36%(体积分数)乙酸-水(体积比38∶2∶60);流速：1.0 mL·min-1;检测波长：285 nm;柱温： 25 ℃。结果 橙皮苷在0.103～2.060 μg范围内线性关系良好，r=0.999 9，平均回收率为95.87%(n=6)，RSD=2.46%，3批橘核中橙皮苷含量介于0.1～0.2 mg·g-1之间。结论 该方法简便、准确，可作为橘核中橙皮苷的定量分析和质量控制方法。
【关键词】 橘核;橙皮苷;含量测定;质量控制;高效液相色谱法
Abstract:ObjectiveTo establish a HPLC method for the determination of hesperidin in semens of Citri Reticulatae.Methods HPLC was performed on Kromasil-C18 column (250 mm×4.6 mm,5 μm) at 25 ℃ with the mobile phase of methanol-36% acetic acid-water (38∶2∶60) at a flow rate of 1.0 mL·min-1,and the detection wavelength was set at 285 nm.Results The linearity of hesperidin was good in the range of 0103-2.060 μg, r=0.999 9,and its average recovery rate was 95.87% (n=6),RSD=2.46%.The content of hesperidin in 3 samples was between 0.1 mg·g-1 and 0.2 mg·g-1.Conclusion This method is simple,accurate and suitable for the quantitative determination of hesperidin in Semen Citri Reticulatae.
Key words:Semen Citri Reticulatae;hesperidin;content determination;quality control; HPLC
橘核[1]为芸香科植物橘Citrus reticuluta Blanco及其栽培变种的种子，其味苦，平。归肝、肾经。具有理气、散结、止痛的功效，临床可用于治疗小肠疝气，睾丸肿痛，乳痈肿痛。橘核中含有橙皮苷和柠檬苦素类物质等。目前橘核的质量控制尚缺乏较全面统一的标准，虽已有关于橘核中柠檬苦素类物质含量测定的报道[2]，但柠檬苦素类物质很难得到纯度较高的单体化合物，故将其作为质控指标仍存在一定的局限性。《中国药典》2010版一部[橘核]项下描述“橘核子叶细胞显微观察可见针簇状橙皮苷结晶”，可见橙皮苷是橘核质量控制的指标之一，值得深入研究。橙皮苷具有明确的药理作用，如：维持渗透压、增强毛细血管韧性、缩短出血时间、降低胆固醇等，在临床上可用于心血管系统疾病的辅助治疗，可配制多种防止动脉硬化和心肌梗死的药物，是成药“脉通”的主要原料之一[3]。此外，橙皮苷氢化后是天然甜味剂二氢查尔酮，其甜度是蔗糖的1 000倍，可用于开发功能性食品[4-5]。
本研究旨在建立橘核中橙皮苷的含量测定方法，为橘核质量的评价与控制提供科学依据，为其应用范围的进一步扩大奠定理论基础。
1仪器与试药
1.1仪器
天美LC2000型高效液相色谱仪(LC2030检测器、LC2130泵、L-2200自动进样器)，T2000P色谱工作站;BP211D型电子分析天平(德国sartorius 公司)，LK-400药用粉碎机(浙江城关红利数控制造厂)。
1.2试药
橙皮苷对照品(批号：110721-200613，供含量测定用)购自中国药品生物制品检定所;橘核药材分别购自广东康美药业(1)、广州致信药业(2)及广州市采芝林连锁药店(3)，经广州中医药大学中药学院陈康教授鉴定皆为橘Citri Reticulatae Blanco的干燥种子;流动相所用甲醇为色谱纯，水为双蒸水，其他试剂均为分析纯。
2方法与结果
2.1样品溶液的制备
2.1.1对照品溶液的制备精密称取干燥至恒重的橙皮苷对照品2.06 mg，用甲醇溶解并定容至10 mL，制成每1 mL含橙皮苷0.206 mg的对照品溶液。
2.1.2供试品溶液的制备取经粉碎机粉碎的橘核粉末约1 g，精密称定，用石油醚100 mL索氏提取4.5 h，滤渣挥干石油醚，置圆底烧瓶中，加甲醇20 mL,水浴加热回流1 h，静置冷却至室温，滤过，滤渣再加甲醇20 mL重复提取1次，合并2次滤液，浓缩定容至 10 mL，经0.45 μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。
2.2色谱条件与系统适用性
色谱柱：安谱公司Kromasil C18色谱柱(250 mm×4.6 mm，5 μm);流动相：甲醇-36%(体积分数)乙酸-水(体积比38∶2∶60);流速：1.0 mL·min-1;检测波长：285 nm;柱温：25 ℃。分别精密吸取对照品、供试品溶液各10 μL注入液相色谱仪中，记录色谱图，见图1。
2.3线性关系考察
精密吸取“2.1.1”项下对照品溶液 0.5、1、2.5、5、7.5、10 mL，分别置10 mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，分别精密吸取10 μL进样。按“2.2”项下色谱条件进行测定，测定峰面积。以峰面积积分值(Y)为纵坐标，橙皮苷对照品进样量(X)为横坐标进行线性回归，得回归方程为：Y=2×106X-14823×104，r=0.999 9。结果表明，橙皮苷在0103～2.060 μg之间线性关系良好。[PSd201;S*2〗A.橙皮苷对照品; B.橘核供试品图1 橘核HPLC图Figure 1HPLC chromatograms