正交试验法优选金芍胶囊的醇提工艺

　　2.2.1得膏率精密量取提取液25 mL,置于恒质量蒸发皿中,水浴蒸干,放入105℃的烘箱中,烘3 h,取出,置干燥器中,放置30 min,迅速称定质量,计算得膏率：w得膏＝(m干膏+蒸发皿-m蒸发皿)×V溶液总/(25×m药材)。

　　2.2.2含量计算w含量＝（A样×ρ对×V样×B×1 000)/(A对×m药),其中A样为供试品峰面积，A对为对照品峰面积，V样为提取液总体积（mL），ρ对为对照品浓度（mg/mL），m药为黄柏药材投料量（kg），B为稀释倍数（B＝5）。

　　2.3提取次数的筛选按处方比例取黄柏、当归等药材粗粉,加10倍量体积分数70%乙醇回流提取3次,每次1 h,滤过。依法制备3份,按2.2项下方法分别测定各次提取率及得膏率。表1结果显示：提取2次与3次提取率及得膏率相差不大,为了节约成本,因此确定提取次数为2次。表1提取次数筛选结果(略)

　　乙醇浓度的筛选按处方比例取黄柏、当归等药材粗粉,分别加入10倍量体积分数60%、70%、80%、90%的乙醇回流提取2次,每次1 h,滤过,合并滤液,摇匀。平行制备3份,按2.2项下方法分别测定并计算提取率及得膏率。表2结果显示：提取率以体积分数70%、80%乙醇最高,得膏率体积分数60%乙醇最高,体积分数90%乙醇提取率及得膏率均较低,因此确定以体积分数60%、70%、80%乙醇进行正交试验。表2乙醇浓度的筛选结果(略)

　　2.5正交试验

　　2.5.1试验设计以乙醇用量、乙醇浓度、提取时间为因素采用3因素3水平正交设计表确定最终提取工艺。见表3。表3因素水平表（略）
　　
　　2.5.2正交试验方法与结果按处方比例称取黄柏、当归等药材粗粉,根据上述正交表进行试验,按2.2项下方法分别测定提取率及得膏率,采用综合评分法进行数据统计分析(其权重指数分别为0.8、0.2),以确定最佳提取工艺,数据及结果见表4,方差分析见表5。表5方差分析表（略）

　　从正交试验结果和方差分析可知,3个因素对盐酸小檗碱的提取率无显著性影响；得膏率中各因素的影响程度依次为B>A>C。体积分数60%乙醇提取,得膏率高但提取率较低,体积分数80%、70%乙醇提取结果相差不大,综合考虑,确定最佳提取工艺为A3B2C1,即用体积分数70％乙醇回流提取2次,每次1 h。表4正交试验数据及结果（略）注：s综合=s盐酸小檗碱提取率+s得膏率；s盐酸小檗碱提取率=p盐酸小檗碱提取/p最大盐酸小檗碱提取×0.8×100；s得膏率=p得膏/p得膏率最大值×0.2×100

　　2.5.3中试放大试验按处方比例称取黄柏、当归等药材粗粉,共25.5 kg,加体积分数70%乙醇(8、6倍量)回流提取2次,每次1 h。

　　表6结果显示：中试放大试验验证了上述正交试验法确认的提取工艺参数可行,其中盐酸小檗碱的含量为30.38 g/kg,提取率为87.29%。表63批中试结果（略）

　　3讨论

　　黄柏具有抗菌消炎、降压等作用,其药理、临床作用之强弱,与盐酸小檗碱含量高低有直接关系［3］,而盐酸小檗碱易溶于热水、乙醇,且在浓缩过程中易损失,在中药复方制剂中常单独提取。据文献报道［4-5］,对于黄柏生物碱,乙醇提取优于酸水渗漉和水提取，乙醇回流优于其他提取方法。本工艺选择乙醇回流提取,能有效提取盐酸小檗碱,且工艺简便、经济。

　　为合理选择正交设计各水平,先对加醇量进行了预试,由于药材的吸附作用,通常第1次乙醇提取液比加入液减少的体积大约相当于药材量的2倍体积,为提高生产时提取罐的利用率,本实验采用第2次提取溶剂加入量比第1次少2倍量的方式（如12、10或者10、8）,使提取罐的使用率高达100%。

　　色谱条件参照中国药典（2005年版）一部黄柏药材项下含量测定方法,经试验用于本品提取液含量测定,盐酸小檗碱峰尖锐,分离度大于1.5,且阴性无干扰。本试验确定的工艺简便、稳定,盐酸小檗碱提取率高,适用于工业生产。

【参考文献】
  　　［1］王典瑜,黄巧文,廖彬初.HPLC法测定黄柏炮制前后盐酸小檗碱的含量［J］ .海峡药学,2008,20(1)：47．

　　［2］国家药典委员会. 中华人民共和国药典（一部）［S］.北京：化学工业出版社,2005：214.

　　［3］冯飞.炮制对黄柏小檗碱含量的影响［J］.中药材,1995,18(11)：566.

　　［4］赵骏,齐喜红.生物碱提取方法研究概述［J］.天津中医学院学报,2003,10(4)：4.

　　［5］俞丹,尹莲.黄柏总生物碱提取工艺的优化研究［J］.海峡医学,2008,20(7)：19.