益肾养元合剂质量标准研究
作者：胡燕，简曼曼，侯勤，陈世斌
【摘要】 目的 建立益肾养元合剂的质量控制标准。方法 采用薄层色谱法鉴别益肾养元合剂中的何首乌、金樱子、狗脊；采用高效液相色谱法测定益肾养元合剂中二苯乙烯苷的含量。结果 在薄层色谱中检出了何首乌、金樱子、狗脊；二苯乙烯苷进样量在25.82～826 μg范围内呈良好的线性关系（r＝1.000 0），平均回收率为102.0%，RSD为0.83%（n＝6）。结论 本方法操作简便、专属性强、准确、重复性好，可作为益肾养元合剂的质量控制标准。
【关键词】 益肾养元合剂 何首乌 金樱子 狗脊 薄层色谱法 二苯乙烯苷 高效液相色谱法
Abstract:Objective To establish a method for the quality control of Yishenyangyuan mixture. Methods TLC was used to identify Radix Polygoni Multiflori, Fructus Rosae Laevigatae, Rhizoma Ciboth in the mixture. The content of 2，3，5，4′tettahydroxystilbene2OβDglucoside in the mixture was analyzed by HPLC. Results Radix Polygoni Multiflori, Fructus Rosae Laevigatae, Rhizoma Ciboth could be identified by TLC. 2，3，5，4′tettahydroxystilbene2OβDglucoside showed a good linear correlation over the range of 0.0258-0.826 mg (r=1.000 0). The average recovery of 2，3，5，4′tettahydroxystilbene2OβDglucoside was 102.0% with RSD 0.83% (n=6). Conclusion The method is simple, specific, accurate and reproducible for the equality control of Yishenyangyuan mixture.
Key words:Yishenyangyuan mixture; Radix Polygoni Multiflori; Fructus Rosae Laevigatae; Rhizoma Ciboth; TLC; 2，3，5，4′tettahydroxystilbene2OβDglucoside; HPLC
益肾养元合剂收载于卫生部药品标准第二十册,具有补益肝肾、健脾益气、涩精止遗的功效，用于肝肾不足、脾气虚弱、面色萎黄、倦怠纳差、腰膝酸痛、遗精梦泄等［1］。方中何首乌为主药，原药品标准中仅收载了化学鉴别、狗脊药材的薄层鉴别和2，3，5，4′四羟基二苯乙烯2OβD葡萄糖苷（以下简称“二苯乙烯苷”）的含量测定方法。本文为进一步提高该品种的质量标准，增加了方中何首乌、金樱子的薄层鉴别，并对原标准中的狗脊薄层鉴别和二苯乙烯苷含量测定方法进行了改进，报道如下。
1 仪器与试药
益肾养元合剂（批号：C08001A、C08002A、C08003A、F03001B）均为广州潘高寿药业股份有限公司产品；何首乌对照药材（批号：120934200507）、金樱子对照药材（批号：10479701）、狗脊对照药材（批号：121071200502）及二苯乙烯苷（批号：0844200003）均购自中国药品生物制品检验所；硅胶G预制板由青岛海洋化工公司生产；乙腈为色谱纯；其余试剂均为分析纯。
Agilent1200高效液相色谱仪，色谱柱（Agilent Eclipse XDBC18 4.6 mm×150 mm,5 μm），梅特勒十万分之一天平。
2 薄层鉴别
2．1 何首乌的鉴别
取本品20 mL（批号：C08001A、C08002A、C08003A），加乙酸乙酯20 mL，振摇提取，分取乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇1 mL使溶解，作为供试品溶液。另取何首乌对照药材0.25 g，加乙酸乙酯50 mL，超声处理15 min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1 mL使溶解，作为对照药材溶液。再取不含何首乌的阴性样品，同法制成阴性对照溶液。吸取上述3种溶液各4 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以苯乙酸乙酯甲酸（体积比5∶5∶2）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365 nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。再喷以磷钼酸浓硫酸溶液，热风吹至斑点显色清晰，日光下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的蓝色斑点。阴性对照无干扰，见图1。
1～3.供试品溶液； 4.对照药材溶液； 5.阴性对照溶液
图1 何首乌的TLC图（A.紫外光灯365 nm下;B.日光下）（略）
Figure 1 TLC of Radix Polygoni Multiflori(A.under ultraviolet light at 365nm; B.under the sunlight)
2.2 金樱子的鉴别
取金樱子对照药材7 g，加水50 mL，煎煮30 min，滤过，滤液浓缩至20 mL，另取不含金樱子的阴性样品20 mL，按“2.1”项下的供试品溶液的制备方法分别制备对照药材溶液和阴性对照溶液。吸取“2.1”项下的供试品溶液及上述2种溶液各6～10 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，使成条状，以乙酸乙酯甲醇水（体积比9∶0.8∶0.6）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，105 ℃加热至斑点显色清晰，日光下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的蓝色主斑点。阴性对照无干扰，见图2A。
2.3 狗脊的鉴别
取狗脊对照药材3 g，加水50 mL，煎煮30 min，滤过，滤液浓缩至20 mL，另取不含狗脊的阴性样品20 mL，按“2.1”项下的供试品溶液的制备方法分别制备对照药材溶液和阴性对照溶液。吸取“2.1”项下的供试品溶液及上述2种溶液各4 μL，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以三氯甲烷丙酮甲酸（体积比4∶1∶0.1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%氢氧化钠乙醇溶液，置紫外灯（365 nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。阴性对照无干扰，见图2B。
1～3.供试品溶液；4.对照药材溶液；5.阴性对照溶液
图2 金樱子(A)和狗脊（B）的TLC图（略）
Figure 2 TLC of Fructus Rosae Laevigatae（A） and Rhizoma Ciboth(B)