高效液相色谱法测定帕米膦酸二钠中的β丙氨酸
2.6 稳定性试验
取一份供试品溶液(浙江迪耳药业有限公司，批号：060403)于配制后0、1、3、5、7、8 h进样，其峰面积的RSD为1.2％，表明溶液在8 h内稳定。
2.7 检测限
取对照品溶液逐级稀释各2 mL，分别置10 mL量瓶中，加水3 mL、质量分数5%的碳酸钠水溶液1.0 mL和质量分数4%的2，4二硝基氟苯乙腈溶液2.0 mL，摇匀后立刻在40 ℃下反应2 h，取出，放冷，加水稀释至刻度，摇匀。精密量取反应后的溶液各10 μL，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。当β丙氨酸对照品溶液质量浓度为0.1 μg/mL时，信噪比约为3，因此检测限为0.1 μg/mL(以反应前溶液的浓度计)。
2.8 样品测定
分别按“2.2”项下方法配制供试品溶液，按“2. 1”项下色谱条件进行测定，结果深圳信立泰药业有限公司和宁波人健药业有限公司的帕米膦酸二钠均未检出β丙氨酸，浙江迪耳药业有限公司的帕米膦酸二钠含β丙氨酸为0.1％。
3 讨论
3.1 2,4二硝基氟苯乙腈溶液浓度的影响
取对照品溶液2 mL 5份，分别置10 mL量瓶中，加水3 mL、质量分数5%的碳酸钠水溶液1.0 mL，再向上述5个量瓶分别加3％、4％、5％、7.5％、15％的 2，4二硝基氟苯乙腈溶液2.0 mL，摇匀后立刻在40 ℃下反应120 min，取出，放冷，加水稀释至刻度，摇匀。精密量取反应后的上述溶液各10 μL，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。结果表明：当2,4二硝基氟苯乙腈溶液质量浓度为15%时，β丙氨酸主峰附近的干扰峰影响严重；质量浓度为4%～5%时，β丙氨酸主峰面积基本一致，β丙氨酸主峰与其他峰的分离度良好。所以选用质量浓度为4%的2，4二硝基氟苯乙腈溶液。
3.2 反应时间的影响
取对照品溶液2 mL 8份，分别置10 mL量瓶中，加水3 mL、质量分数5%的碳酸钠水溶液1.0 mL和质量分数4%的2，4二硝基氟苯乙腈溶液2.0 mL，摇匀后立刻在40 ℃下分别反应20、35、45、60、90、120、150、180 min，取出，放冷，加水稀释至刻度，摇匀。精密量取反应后的上述溶液各10 μL，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。结果表明：反应时间小于60 min时，反应后杂质比较多；反应时间在120～180 min时，β丙氨酸主峰面积基本相同。考虑到反应的完全性、简便性和杂质的干扰性，选择120 min作为反应时间。
3.3 色谱柱的影响
将色谱柱更换为迪马C18（250 mm×4.6 mm，5 μm），结果表明空白辅料无干扰，同样满足系统适用性要求。
【参考文献】
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