肺结核性及腺癌性胸水SDSPAGE蛋白图谱分析
【摘要】 目的 分析肺结核性及腺癌性胸水SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDSPAGE )图像之图谱特点及异同，为两者的鉴别诊断奠定基础。方法 选用28例肺结核性胸水及36例肺腺癌性胸水，每例均以5%浓缩胶和不同浓度（6%、8%、10%、12%、15%）之分离胶行SDSPAGE分离胸水中蛋白质，考马斯亮蓝染色，AlphaEaseFC Stand Alone图像分析软件分析10%分离胶凝胶图像。结果 不同浓度（6%、8%、10%、12%、15%）的分离胶SDSPAGE图像表明, 肺结核性胸水及肺腺癌性胸水经10%SDSPAGE分离，两者的胸水蛋白在40～200 kD范围内均可稳定分离得到10条蛋白条带。这些条带蛋白质分子量分别为200 kD、152 kD、134 kD、118 kD、103 kD、98 kD、84 kD、62 kD、54 kD、43 kD。含量达60%以上的蛋白质分子量在54 kD至84 kD之间。50～60 kD区间的蛋白质含量肺结核性胸水高于肺腺癌性胸水，差异具有显著性。结论 10%及12%的分离胶对胸水中的蛋白具有较好的分离效果；经10%的分离胶分离，肺结核性胸水分子量在50～60 kD区间内的蛋白含量高于肺腺癌性胸水，具有鉴别诊断价值。
【关键词】 SDSPAGE 蛋白 肺癌 肺结核 胸水 图像分析
肺结核及肺腺癌是临床上引起胸水的两种常见疾病［1-5］。目前，有近20%的结核性和癌性胸水在临床经全面检查后仍难以鉴别［6］，因而影响疾病的治疗。由于结核性和癌性胸腔积液的治疗及预后有很大的差别, 因此两者的鉴别至关重要。胸水蛋白SDSPAGE图谱的图像分析尚未见报道。为探讨肺结核性及腺癌性胸水SDSPAGE蛋白图谱分析的诊鉴价值，笔者进行了研究。
1 材料与方法
1.1 研究对象
收集南方医院2007年7月至2008年7月的肺结核性胸水28例及肺腺癌性胸水36例。其中男性33 例，女性31例，平均年龄(48.25±14.76)岁。每例均经细胞病理学、组织病理学或结合临床资料确诊。所有胸水标本离体后，立即4℃4 000 r/min，离心10 min；取上清，分装后–20 ℃冻存。
1.2 SDSPAGE凝胶电泳
制备6%、8%、10%、12%及15%的分离胶和5%浓缩胶。取3 μL胸水与3 μL 2×SDS上样缓冲液混匀，煮沸3 min，离心后上样电泳。设置电压分离胶90 V 30 min，浓缩胶120 V 3 h至溴酚蓝指示剂达凝胶底部时终止电泳，参照文献 ［7-9］行凝胶染色与脱色。
染色后的凝胶经凝胶成像系统CCD摄相取图, 用AlphaEaseFC Stand Alone软件行凝胶图像分析，并参照文献［10-11］用图像分析方法定量分析蛋白质含量。
1.3 统计学处理
用SPSS13.0统计软件进行数据分析与处理，计量资料以均数±标准差(±s)表示，蛋白条带的分子量选用两样本t检验，蛋白条带的百分含量选用非参数秩和检验，以P＜0.05为差异有显著性。
2 结果
2.1 不同浓度分离胶之凝胶图像
图1A～E为不同浓度（6%、8%、10%、12%、15%）的分离胶对胸水中不同分子量的蛋白分离结果，可见在6%和8%分离胶中，只能得到小于10条的大分子蛋白条带，白蛋白及其以下小分子量的蛋白在电场作用下迁移出凝胶。在10%分离胶中，可得到包含白蛋白在内的10～13条蛋白条带。在12%和15%分离胶中，白蛋白（分子量66 kD, 图中深染粗大的条带）及其以下分子量的蛋白得到分离。
图1 胸水蛋白不同浓度分离胶的SDSPAGE凝胶图像（略）
Figure 1 The SDSPAGE image of pleural fluid proteins separated by separation gel of different concentration
通过比较不同浓度（6%、8%、10%、12%、15%）的分离胶的凝胶图像，发现10%及12%的分离胶能使40～200 kD范围内的蛋白质得到较好的分离，而胸水中的大部分蛋白质都分布在这一区间。28例肺结核性胸水中有26例、36例肺腺癌性胸水中有32例都稳定检出10条蛋白条带，此外2例肺结核性胸水和4例肺腺癌性胸水可检出13条蛋白条带。对上述稳定检出10条蛋白条带的26例肺结核性胸水和32例肺结核性胸水采用10%分离胶的凝胶图像进行分析。
2.2 肺结核性胸水与肺腺癌性胸水10%SDSPAGE凝胶的蛋白条带及分子量分析
肺结核性胸水与肺腺癌性胸水经10%分离胶的SDSPAGE凝胶电泳分离，可稳定检出10条蛋白条带（图2），两组各蛋白条带的分子量见表2。经两样本t检验，两组间各蛋白条带的分子量差异均无显著性（P＞0.05）。这些稳定检出的10条蛋白条带分子量分别为200 kD、152 kD、134 kD、118 kD、103 kD、98 kD、84 kD、62 kD、54 kD、43 kD。
2.3 肺结核性胸水与肺腺癌性胸水各分子量条带的蛋白含量比较
表2为肺结核性及腺癌性胸水中稳定检出的10条蛋白条带的蛋白含量分析结果。经非参数秩和检验，200 kD、152 kD、134 kD、118 kD、103 kD、98 kD、84 kD、43 kD这些分子量条带的蛋白含量在肺结核性胸水与肺腺癌性胸水间差异均无显著性（P＞0.05）。肺结核性胸水分子量62 kD和54 kD条带的蛋白含量均高于肺腺癌性胸水，差异具有显著性（P＜0.05）。
泳带1、2、3为肺结核性胸水； 4为蛋白分子量Marker，分子量从上至下依次为：95 kD,72 kD,55 kD,43 kD；5、6、7为肺腺癌性胸水
图2 肺结核性及腺癌性胸水10%SDSPAGE凝胶图像（略）
Figure 2 The 10%SDSPAGE image of pleural fluid of lung adenocarcinoma pleural fluid and lung tuberculosis
表1 10%SDSPAGE肺结核性胸水与肺腺癌性胸水各蛋白条带的分子量（略）
Table 1 The molecular wieght of every strap in pleural fluid of lung adenocarcinoma and lung tuberculosis seperateded by 10%SDSPAGE
2.4 蛋白条带波形图分析
图3为肺结核性胸水和肺腺癌性胸水两类混合胸水的蛋白条带波形图，可见肺结核性胸水和肺腺癌性胸水的蛋白条带波形基本相似，在分子量50～60 kD区间，肺结核性胸水的蛋白含量高于肺腺癌性胸水。
图3 10%SDSPAGE肺结核性胸水及肺腺癌性胸水凝胶蛋白条带波形图
Figure 3 The oscillogram of protein straps in pleural fluid of lung adenocarcinoma and lung tuberculosis seperateded by 10%SDSPAGE
表2 10%SDSPAGE肺结核性胸水与肺腺癌性胸水各蛋白条带的蛋白百分含量（略）
Table 2 The content in percent of every strap in pleural fluid of lung adenocarcinoma and lung tuberculosis seperateded by 10%SDSPAGE