肺结核性及腺癌性胸水SDSPAGE蛋白图谱分析
3 讨论
肺结核和肺腺癌是引起胸水的两大病因, 临床上如何早期确诊和及时治疗是常常遇到的难题。本文从胸水蛋白质方面寻找两者间的差异，为其鉴别诊断提供依据。
汪得喜等［12］研究应用SELDITOFMS检测了27 例渗出性胸液标本, 对获得的蛋白信号进行分析发现良恶性胸腔积液标本有6个蛋白信号呈现差异，但研究未涉及肺结核和腺癌性胸水的鉴别。
区带电泳是临床检验领域中应用最广泛的技术。Chen 等［13］电泳技术应用于胸腔积液渗出液与漏出液的鉴别诊断。秦慧等［14］将琼脂糖凝胶蛋白电泳技术应用于良、恶性胸腔积液的鉴别，结果表明:结核性胸腔积液组的胸液α1 球蛋白、α2 球蛋白及α2 球蛋白/白蛋白的比值均高于肿瘤组, 差异具有显著性。上述研究均采用琼脂糖凝胶电泳方法，均未涉及肺结核和腺癌性胸水的鉴别。由于琼脂糖是大分子筛系统，仅能使大分子量的蛋白质得以分离。SDSPAGE形成的分子筛孔远小于琼脂糖，能使相应蛋白质得到较全面的分离，且分辨率高于琼脂糖电泳［15］。本文将SDSPAGE应用于肺结核性及腺癌性胸水的鉴别诊断，发现与琼脂糖电泳分离相比，能得到更多的蛋白条带，两者胸水蛋白含量在50kD60kD区间有明显差异。
SDSPAGE凝胶电泳即SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳，是根据电场作用下不同分子量蛋白质在凝胶中的迁移率不同，将蛋白质按分子量大小不同加以分离。不同浓度的分离胶形成的分子筛大小不同，因而分离的蛋白分子量范围也不同。本实验用6%、8%、10%、12%、15%不同浓度的分离胶与5%的浓缩胶分离肺结核性与腺癌性胸水，得到不同分离胶浓度下的蛋白分离图谱。6%或8%的分离胶，由于形成的分子筛筛孔较大，只能使分子量在66 kD(白蛋白)以上的蛋白质得到较好分离；15%的分离胶，由于形成的分子筛筛孔较小，可使分子量在66 kD(白蛋白)以下的蛋白质得到较好分离；10%及12%的分离胶能使40～200 kD范围内的蛋白质得到很好的分离。胸水中的大部分蛋白质都分布在40～200 kD区间，因此，我们进一步用10%分离胶对肺结核性及腺癌性胸水进行了分离，并比较两者间的差异。
肺结核性及腺癌性胸水经10%分离胶的SDSPAGE分离，在分子量40～200 kD范围内均可稳定得到10条蛋白条带。这些条带的蛋白分子量分别为200 kD、152 kD、134 kD、118 kD、103 kD、98 kD、84 kD、62 kD、54 kD、43 kD。分子量在54 kD到98 kD之间的蛋白含量占总蛋白含量的60%以上，这部分蛋白为胸水中的高丰度蛋白，其中包含分子量为66 kD的来自血浆的白蛋白［16 ］。
凝胶图像分析表明，肺结核性胸水与肺腺癌性胸水均含来自血浆的高丰度的白蛋白（分子量66 kD）。这些高丰度白蛋白的存在，掩盖了低丰度蛋白的显现，使小分子蛋白不能很好分离。因此，为进一步分离，去除胸水中的高丰度白蛋白，将有利于低丰度的小分子蛋白的显现和差异蛋白的检出。此外，28例结核性胸水中有2例，36例肺腺癌性胸水中有4例可检出分子量为166 kD、147 kD和93 kD的3个蛋白条带，这些蛋白是否为肺结核性胸水与肺腺癌性胸水的特异性差异蛋白，有待进一步研究。
蛋白含量分析表明，肺结核性胸水分子量62 kD和54 kD蛋白条带的蛋白含量要高于肺腺癌性胸水，且两者间的差异具有显著性（P＜0.05）。混合样本蛋白条带蛋白含量波形分析表明：在分子量50～60 kD区间，肺结核性胸水的蛋白含量要高于肺腺癌性胸水，具有鉴别诊断研究价值。至于这些含量差异的蛋白是何种蛋白，有待进一步研究。
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