NBD多肽治疗实验性溃疡性结肠炎的实验研究

来源:岁月联盟 作者: 时间:2015-05-10

  2.2  两组大鼠炎症活动指数(IAI)   两组大鼠在灌肠苏醒后均逐渐出现懒动、拱背、厌食、体质量下降、大便次数增多,主要为稀便和脓血便,但治疗组症状明显轻于对照组,差异有显著性(P<0.01),说明NBD多肽对TNBS诱导的结肠炎症具有治疗作用。见表1。

  2.3  两组大鼠MPO、MDA活性测定  经NBD多肽处理的大鼠MPO、MDA活性明显下降,说明NBD多肽对溃疡性结肠炎局部组织细胞内的过氧化状态有抑制作用,减少氧化应激,对结肠炎症进展有抑制作用,见表1。

  2.4  两组大鼠NFκB的表达  其主要表达于表皮、隐窝上皮细胞和巨噬细胞等。治疗组胞质中多呈棕黄色而胞核中为淡黄色,对照组胞质多为深棕黄色,阳性细胞百分率(%)和A值明显降低,两组比较差异有显著性 (P<0.01),说明对照组的NFκB表达较为活跃,前炎症介质生成活跃,炎症比较严重。见表1、图2。

  表1  两组各项指标评分结果(略)

  Table 1  Scores of every index of two groups

  与对照组比较:*P<0.01

  图2  免疫组化结果 (SP×200) (略)

  Figure 2  Immunohistochemistry (SP×200)

  3  讨论
   
  目前认为,溃疡性结肠炎发病机制与现核旁型抗中性粒细胞抗体(antineutrophil cytoplasmic antibodies,pANCA)[4]、NFκB基因编码NFκB p105/p50异构体的功能多态性、过氧化物酶体增生物激活受体(PPAR)、TNFα、IL1,6,8等促炎转录及其相关转录因子、炎性因子[5]、氧化应激损伤等多种因素多种机制的作用有关。本课题组研究已证实TNBS/乙醇所诱导的大鼠IBD模型中NFκB活性在炎症的不同时间点均异常激活,调节黏附分子等炎性基因的表达,参与疾病的发生发展[6]。
   
  核因子NFκB是由Sen等于1986 年首次从B细胞核提取物中发现的一种能与免疫球蛋白k轻链基因的增强子κB序列特异结合的蛋白因子。现证实其广泛存在于真核细胞内,能与多种细胞基因启动子或增强子序列特定位点发生特异性结合而促进转录和表达,与炎症反应、免疫应答以及细胞的增生、转化和凋亡等重要的病理生理过程密切相关。NFκB是重要的促炎转录因子,正常情况下以非活性态存在于胞浆中,在TNFα等胞内外因子作用下使IκB激酶催化对IκB磷酸化,NFκB产生核易位而激活,并进入细胞核内,结合于基因启动子5区含有κB结合位点的TNFα、IL2、IL6、IL8、TNFB、粒巨噬集落刺激因子、B整合素、黏附分子等炎性因子的基因位点上,促进相应的基因表达、细胞因子释放;释放的细胞因子又可以反过来进一步活化NFκB[5,7],形成正反馈调节,导致炎症反应失控,引起组织损伤[8];抑制NFκB的表达可以减轻炎症,打断这种正反馈过程。但体内其他正常生理活动必需的细胞因子的转录也需要NFκB的活化,盲目地阻断NFκB的功能可干扰体内正常的生理过程,非特异性的NFκB抑制剂会产生严重副作用。
   
  NFκB的激活所需要的IKK复合物中,IκKα和IκKβ有相似的结构与较高的同源性,C端调节酶活性的螺旋环螺旋结构域(helixloophelix,HLH)结构可使激酶发挥高效活性,但必须在其中的6个氨基酸的区域(NEMObinding domain,NBD)与2种调节亚基IκKγ(也称NEMO,NFκB essential modulator,NFκB必需调节物或IκKAP,IκK associated protein,IκK连接蛋白)结合方能发挥作用。据此设计合成的只有6个氨基酸的长度 (H2NLeuAspTrpSerTrpLeuCOOH)的NEMO结合的NBD多肽,可以选择性阻断两者的结合,阻断干扰IKKα、IKKβ与NEMO的相互作用,选择性抑制NFκB活性,抑制促炎症基因的表达,从而改善IBD病情。而且由于其作用具有选择性,不至于影响NFκB的所有功能,并避免完全抑制NFκB的活性的毒副反应,且还具有分子结构小、活性极高、免疫原性低,进入细胞后不易被降解、设计、合成简便等优点,在具有良好的穿透性的透细胞性多肽载体帮助下可以顺利地进入细胞内发挥作用。
   
  本实验中治疗组的NFκB表达较对照组明显下降,证实了NBD多肽能抑制NFκB的表达。治疗组的组织损伤、组织学评分均较对照组明显减轻,作为反映临床症状的IAI评分也是如此,与NFκB的变化规律相同。MPO、MDA作为反映组织氧化还原状态和氧化应激情况的指标,治疗组明显低于对照组,说明组织内过氧化压力减轻,氧自由基生成和造成的损伤降低,推测与NFκB表达受到抑制后炎症介质产生减少有关。
   
  总之,NBD多肽对于溃疡性结肠炎有较好的疗效,有必要进行更大规模的实验来进一步证实。

【参考文献】
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