鞣酸小檗碱口服结肠定位包衣片的制备及体外释药性
2.3.3 精密度试验 精密称取鞣酸小檗碱对照品约25 mg，置500 mL量瓶中，分别用人工小肠液、人工结肠液1、人工结肠液2溶解，定容，得50 μg/mL的贮备液。分别精密量取贮备液3 mL置10 mL量瓶中，稀释至刻度(质量浓度为15 μg/mL);重复测定6次，结果其RSD分别为0.56%、0.34%、0.68%，显示该方法精密度良好。
2.3.4 稳定性试验 取“2.3.3”项下质量浓度为15 μg/mL的鞣酸小檗碱溶液，在37 ℃、自然光下放置，于0、6、12、24 h取样测定吸光度并计算RSD值。结果表明鞣酸小檗碱在各释放介质中稳定，其在人工小肠液、人工结肠液1、人工结肠液2中的RSD分别为0.21%、0.36%和0.27%，符合要求。
2.3.5 回收率试验 精密称取鞣酸小檗碱对照品约25 mg，分别置500 mL量瓶中，加入处方比例的各辅料，按“2.3.1”项操作，人工小肠液和人工结肠液1配制质量浓度为18、12、6 μg/mL，人工结肠液2配制质量浓度为32、20、8 μg/mL，于342 nm处测定吸光度，计算回收率，见表1。结果表明鞣酸小檗碱在各介质中的回收率良好,RSD均小于2%。表1 回收率试验结果
2.4 鞣酸小檗碱结肠定位包衣片体外释放度的测定
2.4.1 鞣酸小檗碱结肠定位包衣片的释放度试验[10] 按中国药典2005年版二部附录的第三法测定，取鞣酸小檗碱结肠定位包衣片6片，置250 mL的介质中，温度为37 ℃，转速为100 r/min，定时取样2 mL，同时补充等量同温介质，用0.8 μm微孔滤膜过滤，精密吸取续滤液1 mL，用相应介质稀释至5 mL后于342 nm处测定吸光度，通过标准曲线计算释放度(Q)。释放介质依次为0.1 mol/L HCl(2 h)、pH 6.8磷酸盐缓冲液(5 h)、人工结肠液2(7 h，在人工结肠液2试验过程中不断通入CO2)。
2.4.2 酶降解材料的筛选 分别以果胶、瓜尔豆胶、壳聚糖为包衣膜材料，制备鞣酸小檗碱包衣片，根据释放度情况，选择适宜的酶降解包衣材料。果胶、瓜尔豆胶、壳聚糖在人工小肠液(5 h)、人工结肠液1(7 h)中释放结果见图1。
从图1可见，果胶包衣膜的水溶性较高，在人工小肠液中5 h释放度达到57%，在人工结肠液1中7 h释放度为36%;瓜尔豆胶包衣膜在人工小肠液中5 h释放度达到21%，在人工结肠液1中7 h释放度为21%;壳聚糖包衣膜在人工小肠液中5 h释放度为5.2%，在人工结肠液1中7 h释放度为9%。根据药典规定结肠定位制剂在规定的酸性介质与pH 6.8磷酸盐缓冲液中不释放或几乎不释放，而在要求的时间内，于pH 7.5～8.0磷酸盐缓冲液中大部分或全部释放。以果胶包衣的片在人工小肠液(pH 6.8磷酸盐缓冲液)中释放度已达到57%，超过药典关于结肠定位制剂在pH 6.8磷酸盐缓冲液中的释放度要求;以瓜尔胶包衣的片在人工小肠液(pH 6.8磷酸盐缓冲液)中释放度达到21%，也超出了药典要求;以壳聚糖包衣的片在人工小肠液(pH 6.8磷酸盐缓冲液)中释放度为5.2%，符合药典规定，而在人工结肠液1释放度为9%，未达到结肠定位释放的要求。
由于壳聚糖可被结肠中的特异酶降解，因此在人工结肠液1中加入30%大鼠结肠内容物制成人工结肠液2，并考察以壳聚糖包衣的片的释放度。结果见图2。从图2可见，以壳聚糖包衣的片在人工小肠液中5 h释放度为5.3%，在人工结肠液2中7 h释放度大于85%，其释放度符合药典要求。因此本试验选择壳聚糖为酶降解层的包衣材料。
2.4.3 壳聚糖包衣膜增重的选择 壳聚糖包衣膜的厚度对在人工结肠液2中的释放有影响，所以分别考察了壳聚糖包衣膜增重为4%、5%、6%的包衣片的释放情况。结果见图3。
从图3可见，壳聚糖包衣膜增重为4%时，在人工小肠液中释放度为24.4%，超出药典规定的要求;壳聚糖包衣膜增重为6%时，在人工结肠液2中7 h释放度为57.8%，未达到药典规定的释放度要求;壳聚糖包衣膜增重为5%时，在人工小肠液中释放度为5.1%、在人工结肠液2中7 h释放度大于85.0%，符合药典规定。因此确定壳聚糖包衣膜的增重为5%
2.4.4 肠溶层包衣增重的影响 由于壳聚糖在酸性条件下溶解，为了保证药物在胃液中不释放，需要在壳聚糖包衣膜外包肠溶层，所以分别考察了肠溶层包衣增重为2%、3%、4%、5%时包衣片在人工胃液中的释放情况。结果，肠溶层包衣增重为2%时，在人工胃液中2 h内鞣酸小檗碱释放为15.6%;当肠溶层增重为3%、4%、5%时，在人工胃液中2 h内鞣酸小檗碱释放为0%，因此确定肠溶层包衣增重为3%。
2.4.5 包衣片的批内批间稳定性试验 以壳聚糖增重为5%，肠溶层增重3%制备包衣片，以在不同介质中的释放度作为指标，考察批内批间稳定性(每批500片)。结果见表2、表3。
由表2可见，包衣片在人工胃液、人工小肠液中的批内和批间重现性良好。其在人工胃液中无释放;在pH 6.8的人工小肠液中释放度为4.48%，RSD为1.27%(n=3)。由表3可见，鞣酸小檗碱结肠定位包衣片在人工结肠液2中的释放度批内和批间稳定性良好，2 h的释放度为20.62%，RSD为2.0%;4 h释放度为67.95%，RSD为1.18%;6 h释放度为86.09%，RSD为0.36%;7 h累积释放度为86.89%，RSD为0.96%，在6 h时释放度已大于85%。表2 不同批次包衣片在人工胃液、人工小肠液1中的累积释放度表3 不同批次包衣片在人工结肠液2中的累积释放度
3 讨 论
本研究采用多层包衣使鞣酸小檗碱结肠定位包衣片达到结肠定位的目的，其中壳聚糖包衣层起主要的结肠定位作用。壳聚糖能在胃液中溶解，在小肠液中不溶解，而被结肠特异酶降解，为避免壳聚糖包衣膜在胃液中溶解，在壳聚糖包衣膜外层包肠溶性丙烯酸树脂并且通过控制肠溶衣膜的厚度，既保证壳聚糖在胃液中不溶解，又使其不影响药物在结肠液中的释放。
根据中国药典2005版附录XIX要求，结肠定位给药制剂在规定酸液和pH 6.8的磷酸盐缓冲液中不释放或少量释放，在pH 7.4～7.8的磷酸盐缓冲液中大部分释放。本研究发现，当壳聚糖包衣膜太薄时，在pH 6.8的磷酸盐缓冲液中释放度超出药典规定的要求;当壳聚糖包衣膜太厚时，在pH 7.4～7.8的磷酸盐缓冲液中壳聚糖降解太慢，导致药物释放度达不到结肠释放的要求，因此壳聚糖包衣膜的厚度是使鞣酸小檗碱结肠定位包衣片定位到结肠并且释放度达到要求的关键。
【参考文献】
[1] 崔福德.药剂学[M].5版.北京：人民卫生出版社，2004.
[2] 舒德忠，周岐新.盐酸小檗碱对小鼠实验性溃疡性结肠炎的作用研究[J].四川生理科学杂志，2004，26(4)：188.
[3] 王燕斌，唐晓山，杨昭徐.盐酸小檗碱治疗肠易综合征的疗效观察[J].首都医科大学学报，2002，23(2)：151-152.
[4] 台卫平，田耕，黄业斌,等.盐酸小檗碱抑制结肠癌细胞环氧化酶2/钙离子途径[J].中国药理通报，2005，21(8)：950-953.
[5] 迟云峰.小儿鞣酸小檗碱口腔崩解片的制备[J].药学与临床,2008,25(2):189-190.
[6] 闫秀敏，黎明，邢雪林.浅谈黄连素的药理与临床应用[J].中国医药卫生，2005，6(3)：62-63.
[7] 姚水宝，黄小华，杨水新.鞣酸鱼肝油软膏的制备及含量测定[J].中国医院药学杂志，2006，26(1)：87-88
[8] 程静，何继祥，梅群，等.HPLC测定结肠炎中盐酸小檗碱含量[J].中国药师，2007，10(12)：1267-1268.
[9] 张恒.假胶乳包衣红霉素肠溶片的制备和质量评价[J].中国药科大学学报，1994，25(5)：267-270.
[10] 国家药典委员会.中华人民共和国药典：二部[S].北京：化学工业出版社，2005.