不同产地及外观形态夏枯草中齐墩果酸和熊果酸的含量比较
【摘要】 目的 比较不同产地、长度、色泽的夏枯草中齐墩果酸和熊果酸的含量，为更全面地控制夏枯草的质量提供依据。方法 采用高效液相色谱法，以ShimPack C18为色谱柱，乙腈甲醇水乙酸铵(体积比68∶16∶16∶0.5)为流动相，检测波长为215 nm，流速为0.8 mL/min。结果与结论 不同产地夏枯草中齐墩果酸和熊果酸的含量差异较大，果穗短者两者含量高于果穗长者，紫红色果穗者两者含量高于棕色果穗。
【关键词】 夏枯草 产地 果穗 齐墩果酸 熊果酸
Abstract:Objective To compare the contents of oleanolic acid and ursolic acid in Prunella vulgaris with different appearances and from different provenances,in order to control the quality of Prunella vulgaris.Methods Samples were analyzed on a ShimPack C18 column. The mobile phase consisted of acetonitrilemetholwaterammonium acetate (68∶16∶16∶0.5) under a flow rate of 0.8 mL·min-1. The detection wavelength was set at 215 nm.Results and Conclusions There were large differences in contents of oleanolic acid and ursolic acid among Prunella vulgaris with different provenances and appearances, higher in Prunella vulgaris with short and mauve ears. This method was suitable for the quality control of Prunella vulgaris.
Key words:Prunella vulgaris;oleanolic acid;ursolic acid
夏枯草Prunella vulgaris为常用中药，以干燥果穗或全草入药，主要用于治疗目赤肿痛、头痛眩晕、瘰疬瘿瘤、乳痈肿痛、高血压等[1]。夏枯草中含有三萜及苷类、苯丙素类、黄酮类等多种化学成分，其中齐墩果酸和熊果酸是主要活性成分[2,3]。目前文献报道有采用衍生化气相色谱法、毛细管胶束电动色谱法、高效液相色谱法等方法评价夏枯草的质量[4-6]，但对于不同产地、长度、色泽的夏枯草中这两种三萜酸的含量比较还未见报道。本文以高效液相色谱法测定并比较不同产地、长度、色泽夏枯草样品中齐墩果酸及熊果酸的含量，旨在为更全面控制夏枯草的内在质量提供依据。
1 仪器与试药
Agilent 1100高效液相色谱仪：包括G1313A自动进样器，Agilent ChemStations数据处理软件，美国安捷伦科技有限公司;齐墩果酸对照品、熊果酸对照品：中国药品生物制品检定所，批号分别为110709200304、110742200516;乙腈：色谱纯，美国TEDIA公司;甲醇：分析纯及色谱纯，江苏汉邦科技有限公司;石油醚、乙酸铵：均为国产分析纯;夏枯草样品：自采或购自各地药店，经中国药科大学中药学院张勉教授鉴定均为夏枯草Prunella vulgaris。
2 实验方法
2.1 色谱条件
参照文献[5]调整了流动相比例及流速。
色谱柱：ShimPack C18柱(4.6 mm×150 mm，5 μm);流动相：乙腈甲醇水乙酸铵(体积比68∶16∶16∶0.5);流速：0.8 mL/min;柱温：25 ℃;检测波长：215 nm;进样体积：20 μL。
2.2 对照品溶液的制备
分别精密称取齐墩果酸10.12 mg、熊果酸10.01 mg，以甲醇溶解，定容于5 mL量瓶中，即得齐墩果酸2.024 mg/mL和熊果酸2.002 mg/mL的混合对照品储备液，备用。
2.3 供试品溶液的制备
精密称定药材1.5 g，置索氏提取器内，加乙醚适量，加热回流提取4 h，提取液回收乙醚至干。残渣以石油醚(30～60 ℃)浸提2次，每次15 mL(约2 min)，倾去石油醚，残渣加适量甲醇微热溶解，定量转移至5 mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀， 0.45 μm滤膜滤过，即得。
2.4 线性关系考察
分别吸取一定体积的对照品储备液，以甲醇稀释成不同浓度的齐墩果酸及熊果酸的对照品溶液。分别进样20 μL，记录峰面积，以峰面积为纵坐标，进样量为横坐标，进行线性回归，回归方程分别为：齐墩果酸，Y=4536.1X+200.96，r=0.999 9，线性范围2.024～41.20 μg;熊果酸，Y=4035X+149.2，
r=0.999 6，线性范围2.002～40.04 μg。
2.5 精密度、稳定性及重现性试验
精密度试验(齐墩果酸RSD值为0.36%，熊果酸RSD值为0.97%)和重现性试验(齐墩果酸RSD值为2.6%，熊果酸RSD值为1.9%)结果均符合要求，稳定性试验表明供试液在24 h内稳定(齐墩果酸RSD值为2.43%，熊果酸RSD值为1.56%)。