甲泼尼龙对实验性变态反应性脑脊髓炎大鼠SRp30c的影响
2 结 果
2.1 EAE大鼠发病情况
免疫诱导后，大鼠于第10天始先后发病，表现为体质量进行性下降、尾巴张力减退，继之尾巴无力，并发展为后肢及四肢无力、麻痹、大小便失禁。Kono评分1分以上即为发病。EAE大鼠脑、脊髓组织HE染色光镜下可见小血管充血、管壁增厚、内皮细胞有破坏、血管周围大量炎性细胞浸润，以淋巴细胞为主，并在小血管周围形成典型的“袖套样(cuffing)”改变。而正常对照组大鼠脑和脊髓均未见异常。
2.2 各组大鼠治疗前后评价
大剂量组及小剂量组EAE大鼠经MP治疗后神经损害表现明显改善，而模型对照组大鼠症状无改善。治疗组Kono评分总体下降，而模型组评分增高(图1)。大剂量组与小剂量组给药前后评分改变的差值差异无显著性(P>0.05)。见表1。
2.3 SRp30c mRNA表达结果
各组大鼠脊髓组织均可检测到SRp30c mRNA表达，见表2，图2。大剂量组与小剂量组SRp30c mRNA表达差异无显著性(P>0.05);模型对照组与正常对照组间差异无显著性(P>0.05);而大剂量组、小剂量组SRp30c mRNA表达高于模型对照组、正常对照组，差异有显著(P<0.01或P<0.05)表1 EAE大鼠给药前后Kono评分情况与治疗前比较：▲P<0.01，*P<0.05;与模型对照组比较：#P<0.01表2 各组大鼠SRp30c mRNA的表达
2.4 SRp30c mRNA表达与神经损害评分改善相关性分析
经MP治疗后的大鼠症状评分均有不同程度的改善，对大鼠治疗前后Kono评分改善的差值与其SRp30c mRNA表达值进行相关性分析，r=-0.583，P<0.05，见图3，两者呈负相关，表明SRp30c mRNA的表达值越高，疗效越低。
3 讨 论
EAE病理改变和临床表现与MS极为相似，是国内外公认的研究人类MS发病机制及实验治疗的最适宜模型[5]。糖皮质激素可以通过诱导T细胞凋亡及下调T细胞黏附分子等机制达到治疗EAE的作用[6]。构建Wistar大鼠EAE模型，并予不同剂量MP治疗，大鼠神经损害表现明显得到改善，治疗后Kono评分降低;而模型对照组病情无改善，Kono评分升高。证明糖皮质激素治疗EAE能达到缓解症状，缩短病程的作用。通过比较大剂量组和小剂量组各大鼠评分改善的程度，得出两组间差异无显著性，因此还不足以说明增大MP剂量能提高疗效。本实验样本量不够大，另外大鼠对药物剂量的耐受范围大等因素可能影响结果的评价。是否疗效与剂量存在一定关系还有待继续探讨。
GC是MS急性发作和复发治疗的主要药物，大剂量静脉MP冲击治疗与大剂量强的松口服治疗均能达到类似的疗效[7]。然而大剂量GC的使用，可诱导患者对激素的敏感性下降，甚至出现GC抵抗的可能。而GC抵抗机制非常复杂，在不同的疾病、不同的病人中其发生机制也不尽相同。目前，国内外已有大量研究表明糖皮质激素受体(glucocorticoid receptor，GR)的2种亚型：GRα及GRβ，其比例失常与GC抵抗关系密切。GRα表达量的减少或GRβ表达量的增多，或者两者同时发生变化，均会导致GRα/GRβ比例的改变，高比例与GC敏感有关，而低比例则常发生GC抵抗[8]。GRβ是在GR前体mRNA的选择性剪接过程中形成的。剪接因子SRp30c是富含丝氨酸/精氨酸蛋白家族(serine/argininerich protein，SRP)成员之一，其在促进GR premRNA发生选择性剪接形成GRβ mRNA的过程中发挥着重要作用。Xu[9]等研究表明SRp30c与中性粒细胞中的GRβ表达水平密切相关。杨昊[1]、李居一[2]等对激素抵抗型和激素敏感型哮喘、系统性红斑狼疮、肾病综合征等患者的PBMC中SRp30c mRNA的表达进行研究，进一步证实了其与GRβ以及GC抵抗之间的关系。目前，国内外尚未见MS患者或EAE模型中SRp30c与激素抵抗关系的相关报道。
通过对各组脊髓组织SRp30c mRNA半定量分析发现，未使用MP的模型组与正常对照组之间SRp30c mRNA表达无差异，说明SRp30c mRNA表达与病情无关。而使用过MP的大剂量组和小剂量组SRp30c mRNA表达均高于模型对照组和正常对照组。推断SRp30c mRNA表达在一定程度的增高预示着皮质激素治疗后有发生GC抵抗的可能。研究发现，治疗组各大鼠Kono评分改善的差值与其SRp30c mRNA表达呈负相关，提示SRp30c mRNA表达与MP疗效呈负相关，进一步证明其与GC敏感性下降有着密切的关系。EAE模型发生GC抵抗的机制中SRp30c可能扮演着重要的角色，推断SRp30c也与MS患者发生激素抵抗有着密切的关系。
【参考文献】
[1] 杨昊，刘荣玉. 糖皮质激素敏感型与抵抗型患者GRα、GRβ及SRp30c mRNA表达水平[J].中华内科杂志，2006,45(3):223-224.
[2] 李居一，徐建华. 糖皮质激素受体α,β 和剪接因子SRp30c在系统性红斑狼疮的表达及意义[J].中华风湿病学杂志，2007,11(5):262-266.
[3] 徐玉，刘瑞春，王颖，等. Wistar大鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎模型的建立[J]. 脑与神经疾病杂志，2007，15(6):415-417.
[4] KONO DH,URBAN JL,HORVATH SJ,et al. Two minor determinants of myelin basic protein induce experimental allergic encephalomyelitis in SJL/J mice[J]. J Exp Med,1988,168(1):213-227.
[5] PETRY KG,BOULLERNE AI,POUSSET F,et al. Experimental allergic encephalomyelitis animal models for analyzing features of multiple sclerosis[J]. Pathol Biol (Paris),2000,48(1):47-53.
[6] WüST S,VAN DEN BRANDT J,Tischner D,et al. Peripheral T cells are the therapeutic targets of glucocorticoids in experimental autoimmune encephalomyelitis[J]. J Immunol,2008,180(12):8434-8443.
[7] THROWER BW. Relapse management in multiple sclerosis.[J]. Neurologist，2009，15(1):1-5.
[8] LEWISTUFFIN LJ,Cidlowski JA. The physiology of human glucocorticoid receptor beta(hGR beta) and glucocorticoid resistance[J]. Ann N Y Acad Sci,2006,1069:1-9.
[9] XU Q,LEUNG DY,KISICH KO. Serineargininerich protein p30 directs alternative splicing of glucocorticoid receptor premRNA to glucocorticoid receptor beta in neutrophils[J]. J Biol Chem,2003,278(29):27112-27118.