款冬花多糖提取工艺研究
【摘要】 目的 探索超声法提取款冬花多糖的工艺条件,为款冬花多糖的提取工业化提供理论依据。方法 采用正交试验法,对甘肃款冬花多糖的提取工艺进行研究。结果 最佳工艺为10倍量水,水温40 ℃,超声时间50 min,频率为50 kHz。结论 此方法是一种简单、快捷、高效的提取方法。
【关键词】 款冬花；款冬花多糖；含量测定；提取工艺
款冬花来源于菊科植物款冬(Tussilago fafarae L.)的干燥花蕾,为临床常用中药。主要用于治疗新久咳嗽、劳嗽咯血等症[1]。多糖具有抗肿瘤、免疫、抗凝血、降血糖和抗病毒等多种活性[2]。本试验采用单因素考察和正交试验方法探讨超声法,提取款冬花多糖的最佳工艺,为款冬花多糖工业化生产提供一定的理论参考。
1 仪器与试药
BS 2245型电子天平(北京赛多利斯仪器系列有限公司)；KQ2100型超声清洗器(昆山市超声仪器有限公司)；UV-9100型紫外分光光度仪(北京瑞利分析仪器公司)；HHS112电热恒温水浴锅(江苏省医疗器械厂)；SHZD Ⅲ循环水式多用真空泵(巩义市英峪子华仪器厂)。葡萄糖对照品(购于中国药品生物制品检定所,批号0833-9504)；款冬花药材(甘肃中医学院李成义教授鉴定)。浓硫酸、苯酚、95%乙醇、乙醚、丙酮等试剂均为分析纯。蒸馏水自制。
2 试验方法
2.1 标准曲线的制备
精密称取105 ℃干燥至恒重的葡萄糖标准品100 mg,置于100 mL容量瓶中,加蒸馏水溶解,稀释至刻度。量取上述溶液10 mL于100 mL容量瓶中,稀释至刻度,得浓度为0.1 mg/mL的葡萄糖标准溶液。精密量取上述葡萄糖标准液0.1、0.2、0.4、0.6、0.8 mL,分别置于10 mL刻度试管中,依次加蒸馏水至2.0 mL,摇匀。分别加入5%苯酚溶液1.0 mL,再迅速加入5.0 mL浓硫酸,振摇5 min,于沸水浴中静置加热15 min,冷却。随行空白。在490 nm处测定吸光度[3]。
以葡萄糖浓度(C)为横坐标,吸光度(A)为纵坐标,进行线性回归。得回归方程：C＝15.67A－0.004 07(r＝0.999 5),浓度在1.22～9.727 mg/mL范围内呈良好的线性关系。
2.2 款冬花多糖的提取
称取1 g款冬花样品粉末(18目),置于100 mL锥形瓶中,加80%乙醇20 mL,在温度为30 ℃、频率为60 kHz条件下超声提取30 min,滤过。同样条件,重提一次。合并药渣。对预处理后的药渣,分别以不同料液比、超声时间、温度和频率进行提取,合并提取液,参照“2.1”项下方法,在波长490 nm处测定吸光度,单因素考察,采用正交试验优选出多糖最佳提取工艺[3]。
3 结果与分析
3.1 不同料液比对款冬花多糖得率的影响
采用提取时间为40 min,温度为30 ℃,频率为50 kHz,考察不同料液比对款冬花多糖得率的影响。结果如图1所示。款冬花多糖得率随料液比的增大而提高,在料液比从1∶15到1∶20,提取多糖的量增长明显,从6.1%到最高值7.48%。当料液比为1∶20时,款冬花中的多糖成分已基本溶出,再增加提取液,多糖的得率减少。
3.2 不同时间对多糖得率的影响
采用料液比为1∶20,提取温度为30 ℃,频率为50 kHz,考察不同提取时间对款冬花多糖得率的影响。结果如图2所示。结果表明,多糖的得率起初上升较快,提取至40 min时,达到最高点,而随着超声时间延长,多糖的得率反而减少。由于超声处理时间过长,可能导致部分多糖结构发生变化,糖链断裂,使多糖含量下降。
3.3 不同提取温度对多糖得率的影响
采用料液比为1∶20,提取时间为40 min,频率为50 kHz,考察不同温度对款冬花多糖得率的影响。结果如图3所示。结果表明,30 ℃和40 ℃提取,对多糖得率差异不大,当温度的上升50 ℃时,多糖得率从6.97%升高到11.21%。随着温度的上升,多糖分子的运动速度加快,使其更容易从款冬花细胞中提取出来,且热作用对细胞有破坏作用,使多糖更容易溶出。提取温度为60 ℃时,由于部分多糖水解,多糖得率略有下降。
3.4 不同频率对多糖得率的影响
采用料液比为1∶20,温度为30 ℃,时间为40 min。考察不同频率对款冬花多糖得率的影响,结果如图4所示。不同频率对款冬花多糖得率的影响不明显,30～70 kHz条件下,多糖的得率在8.095%～11.44%之间,频率为50 kHz时,多糖的得率最高。