双黄连颗粒中绿原酸含量的HPLC测定

　　2.3  线性关系的考察

　　取同一对照品溶液(60.51 μg/mL),分别精密吸取1、2.5、5、10、20 μL注入液相色谱仪,测定峰面积。以峰面积积分值为纵坐标,绿原酸对照品进样量为横坐标绘制标准曲线,计算回归方程为：Y＝105 427X＋586.43,r2＝0.999 5,表明绿原酸在0.060～1.210 μg之间呈良好的线性关系。

　　2.4  精密度试验

　　取同一对照品溶液,重复进样6次,每次进样10 μL,测定绿原酸峰面积,结果RSD＝0.14%,表明精密度良好。

　　2.5  重复性试验

　　取同一批号(批号20081101)供试品,按供试品溶液制备方法制备5份供试液,依法测定每份样品中绿原酸的含量。结果RSD＝1.18%,表明本法重复性良好。

　　2.6  稳定性试验

　　取同一批号(批号20081101)供试品,按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液,分别在0、2、4、6、8 h测定峰面积,RSD＝0.76%(n＝5)。表明制备的供试品溶液在8 h内稳定。

　　2.7  加样回收率试验

　　采用加样回收法。精密称取已知含量的同一批样品(批号20081101,含量为5.217 mg/g)0.2 g,置50 mL量瓶中,分别精密加入绿原酸对照品溶液(0.375 mg/mL)各3 mL,蒸干,按“2.2.2”项下方法制备供试液,照上述色谱条件测定。分别进样10 μL,测定绿原酸峰面积并计算绿原酸含量(见表1) 表1加样回收率试验结果,结果平均回收率为99.3%,RSD＝0.82%(n＝6)。

　　2.8  样品测定

　　对3批中试产品进行测定,结果见表2。表2样品测定结果

　　3  讨论

　　根据3批测定结果,每1 g含金银花以绿原酸(C16H18O9)计均不少于5.0 mg,考虑到药材产地、加工、运输、贮藏等因素的影响,药材中绿原酸也会有较大的差别,因此暂规定本品每1 g含金银花以绿原酸(C16H18O9)计,不得少于4.5 mg。

　　为了保证供试品中绿原酸提取完全,本试验对供试品超声处理时间进行了考察,分别超声处理10、20、30 min进行测定,测得样品中对应的绿原酸含量分别为4.56、5.18、5.20 mg/g,结果表明,超声处理20 min与30 min含量变化不大,从节约能源考虑,规定超声处理20 min为提取时间。

　　本研究采用HPLC法对双黄连颗粒中绿原酸进行含量测定,试验结果表明,所建立的方法稳定、准确、可行,能有效控制双黄连颗粒的内在质量,确保临床疗效。

【参考文献】
  　1 国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[S].北京：化学工业出版社,2005.406－408.