止痒洗剂的定性定量分析

　　3 含量测定

　　3.1 色谱条件

　　Hypersil C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5 μm),甲醇-水(70∶30)为流动相,流速为1.0 mL/min,检测波长为322 nm,理论塔板数按蛇床子素计算不得低于3 000。

　　3.2 线性关系的考察

　　精密称取经五氧化二磷减压干燥12 h以上的蛇床子素对照品10.40 mg,置于10 mL容量瓶中,加入甲醇超声溶解并定容至刻度(每1 mL含蛇床子素1.04 mg)。取上述对照品溶液,加甲醇稀释,定容至刻度,依次制成130.00、65.00、32.50、16.25、8.13、4.06、2.03、1.02 μg/mL的溶液。分别精密吸取上述各对照品溶液20 μL,注入液相色谱仪,测定峰面积,并以进样浓度为横坐标,吸收峰峰面积为纵坐标,进行线性回归,回归方程为：Y=92 851X+27 076,r=0.999 9,蛇床子素在0.02～2.60 μg范围内呈良好的线性关系。

　　3.3 供试品溶液的制备

　　止痒洗剂10 mL置于25 mL容量瓶中,加甲醇定容至刻度,密塞,称定重量,超声处理(功率300 W,频率50 kHz)10 min,放冷,再称定重量,用甲醇补足减失的重量。精密吸取上清液,用0.45 μm的微孔滤膜滤过,滤液作为供试品溶液。

　　3.4 可行性试验

　　按处方量制备蛇床子缺味阴性对照溶液。精密吸取对照品、供试品及阴性对照溶液各20 μL,分别注入液相色谱仪,测定。结果显示,在与对照品色谱峰相应的位置上,供试品溶液出现相同保留时间的色谱峰,蛇床子素和样品中其他组分色谱峰可达到基线分离,蛇床子素与其相邻色谱峰的分离度均大于1.5。阴性对照溶液在此保留时间和位置上无色谱峰,表明阴性对照无干扰。见图1。

　　3.5 精密度试验

　　精密吸取同一批号止痒洗剂10 mL,依法制备供试品溶液,精密吸取20 μL注入色谱仪,重复测定6次,RSD=0.72%(n=6)。

　　3.6 稳定性试验

　　取配制好的供试品溶液,按含量测定方法,分别在0、2、4、6、8、10、12 h进样测定,记录峰面积,结果显示在12 h内稳定,RSD=0.25%(n=7)。

　　3.7 重复性试验

　　精密吸取同一批号的止痒洗剂10 mL,共6份,依法制备供试品溶液,测定,计算,RSD=0.76%(n=6)。

　　3.8 加样回收率试验

　　精密吸取已知含量的止痒洗剂5 mL,共6份,稀释至10 mL,再精密吸取5 mL,分别加入蛇床子素对照品,按样品测定方法制备溶液,测定,计算回收率,结果蛇床子素平均回收率为98.81%。见表1。表1 加样回收率试验结果(n=6)

　　3.9 样品测定

　　精密吸取止痒洗剂,按“3.3”项下方法制备供试品溶液,进样,测定,计算。结果见表2。表2 蛇床子素含量测定结果(n=3)

　　4 讨论

　　本试验采用薄层色谱法对止痒洗剂中的蛇床子、黄柏、防风进行了定性鉴别,方法简便易行,重复性好。

　　在进行色谱条件摸索时,本试验对2种流动相系统即甲醇-水(70∶30)和乙腈-水(65∶35)[1]进行了比较,结果以甲醇-水(70∶30)为流动相,被测组分与其他组分有较好分离,且重复性好,精密度高,经济实用。

　　在供试品溶液(供含量测定用)的制备时,我们对两种提取方法即甲醇超声提取和乙酸乙酯萃取[2-3]进行了比较,测定结果比较接近,考虑到方法的简便易行,故选择甲醇超声提取。

【参考文献】
  　[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[S].北京：化学工业出版社,2005.附录31,220.

　　[2] 阮洪生,秦学功.高效液相色谱法测定妇净洗液中蛇床子素的含量[J].时珍国医国药,2005,16(2)：94-95.

　　[3] 陈艳平,霍 明,陈艳明,等.RP-HPLC测定蛇床子素和妇炎灵胶囊中蛇床子素的含量[J].中成药,2003,25(3)：196-198.