RP-HPLC法测定复方金蒲片中延胡索乙素的含量

　　2.3 线性关系考察

　　精密量取对照品储备液2、4、6、8、10 mL分别置10 mL容量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀。分别取10 ?L进样,测定峰面积,得回归方程：Y=6.04×10-2+2.78×10-6X(n=5, r=0.999 7)。表明延胡索乙素浓度在0.436～2.180 ?g范围内,浓度与峰面积呈良好的线性关系。

　　2.4 精密度试验

　　取同一对照品溶液(每1 mL含0.109 mg延胡索乙素)进行日内和日间精密度试验,测定其峰面积,计算日内RSD=1.56% (n=6),日间RSD=1.77%(n=3)。

　　2.5 重复性试验

　　取同一批供试品,按含量测定方法重复测定,计算RSD=1.70%(n=5),表明本法重复性较好。

　　2.6 稳定性试验

　　另取供试品溶液,自配制后分别在0、2、4、8、12、24 h测定峰面积,RSD=1.61%,表明该溶液在24 h内稳定。

　　2.7 加样回收率试验

　　精密取同一批已知延胡索乙素含量的样品粉末约0.6 g,分别加入不同量的延胡索乙素对照品,按含量测定方法进行测定,结果见表1。表1 加样回收率试验结果(n=3)

　　2.8 样品含量测定

　　取供试品溶液,用微孔滤膜过滤,精密吸取10 ?L进样,按上述色谱条件测定,以外标峰面积法计算延胡索乙素的含量。3批样品的每片含量分别为2.56 mg(RSD=1.12%)、2.42 mg (RSD=0.97%)、2.18 mg(RSD=1.56%)。

　　3 讨论

　　本试验供试品溶液制备考察了回流提取和超声提取2种方法,均用甲醇作为提取溶剂,结果回流提取延胡索乙素的含量比超声法提取略低,所以选用了操作简单的超声法作为提取方法。在超声提取次数的考察中,我们发现,提取1、2、3次延胡索乙素的含量分别为每片1.86、2.18、2.19 mg,可见提取2次和提取3次没有太大的差别,故将提取次数确定为2次。

　　由于延胡索乙素为异喹啉类生物碱,易溶于酸,在碱性溶液中呈游离状,故采用“酸溶解碱沉淀”的方法进行精制,既提高了延胡索乙素的纯度,又大大减少了杂质对测定的影响。

　　本试验比较了甲醇-磷酸缓冲液、甲醇-乙酸(用氨水调节pH)2种色谱系统,结果后者的分离效果好。同时考察了pH分别为5.3、4.7、4.0的分离效果,发现流动相的pH为4.7时,延胡索乙素的峰形最好,分离度也最高。

【参考文献】
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