蒿鳖养阴软坚方中大黄素含量的高效液相色谱法测定

　　2.7 精密度实验精密吸取同一对照品溶液，连续进样5次，每次20 μl，测得大黄素峰面积的RSD为0.75%(n=5)，表明精密度良好。

　　2.8 稳定性实验精密吸取同一对照品溶液，分别在 0，2，4，6，8，10 h 进样测定，结果大黄素峰面积的RSD为0.67%，供试品溶液在10 h内峰面积基本稳定。

　　2.9 重复性实验取同一批号样品，按照“供试品溶液的制备”项下方法操作，制备6份供试品溶液，分别测定，结果大黄素峰面积的RSD为2.4%。证明此方法重现性良好。

　　2.10 加样回收率实验精密称取已知含量的样品(批号070613)6份，每份约0.1 g，加入对照品溶液(214 μg·ml-1)1 ml，按供试品溶液的制备方法制备供试品溶液，分别进行测定，计算回收率。结果见表1。表1 加样回收率实验结果复方称样量m/g复方中大黄素含量m/mg大黄素加入量m/mg测得大黄素的含量m/mg回收率(%)

　　2.11 样品测定取 3 批样品，按照“供试品溶液的制备”项下方法操作制备供试液，各进样 20 μl，计算大黄素的含量。结果见表2表2 样品含量测定结果批号进样量V/μl大黄素平均含量m/mgRSD(%)

　　3 讨论

　　虎杖为蒿鳖养阴软坚方的辅药，具有活血定痛、利胆退黄等作用，其主要成分大黄素具有保肝、抗微生物活性、抗炎等多种药理作用[1]，特别大黄素具有抗肝纤维化的作用并逐步阐明了其作用机制[2]，因此用大黄素作为本方的定量指标，同时也可部分体现本方的药理作用，具有重要意义，将有助于抗肝纤维化的新药蒿鳖养阴软坚方的进一步研究。

　　本实验首先用甲醇超声提取，挥去溶剂后，加酸和三氯甲烷水浴加热回流提取[3,4]，并与直接加三氯甲烷和硫酸溶液，水浴加热回流提取的方法进行比较，结果表明，后者操作简便，重现性良好，且样品回收率高。

　　本制剂为复方制剂，有效成分较多，参照2005版《中国药典》Ⅰ部以甲醇∶0.1%磷酸(80∶20)为流动相[5]检测，大黄素峰受到其他成分干扰，分离度较差，改用甲醇∶0.1%磷酸(75∶25)为流动相，分离度较好，且色谱系统重复性和精密度均好，适用于蒿鳖养阴软坚方中大黄素的定量分析。

【参考文献】
  　　[1] 丁 艳，黄志华.大黄素药理作用研究进展[J].中药药理与临床,2007,23(5)：236.

　　[2] 展玉涛，刘 宾，李定国，等.大黄素抗肝纤维化的作用机制[J].中华肝脏病杂志，2004，12(4)：245.

　　[3] 孙文武.高效液相色谱法测定健肝颗粒中大黄素的含量[J].中国医院药学杂志，2007，27(9)：1323.

　　[4] 蒙 毅，范卫锋，钟一雄，等.HPLC法测定红穿破石中大黄素和大黄素甲醚[J].中草药，2007，38(9)：1410.

　　[5] 国家药典委员会.中国药典， Ⅰ部[S].北京：化学工业出版社，2005：17