护心颗粒中人参和三七的皂苷成分的提取工艺研究

来源:岁月联盟 作者:穆启运,阮新民 时间:2015-05-19

  2.3.4 精密度实验精密吸取同一对照品混合溶液10 μl,重复进样检测6次,记录峰面积,计算得到三七皂苷R1峰面积的相对标准偏差RSD=1.42%,人参皂苷Rg1峰面积的RSD=1.09%,人参皂苷Rb1峰面积的RSD=1.16%,3种皂苷峰面积之和的RSD=0.91%。 结果表明测量实验精密度良好。

  2.3.5 稳定性实验精密吸取同一供试样品溶液10 μl ,分别于0 ,2 ,4 ,6,8和10 h时进样,测定峰面积。按“2.3.3”项下的回归方程计算3种皂苷及它们之和的质量分数的RSD(%):三七皂苷R1质量分数的RSD=1.25%,人参皂苷Rg1质量分数的RSD=0.97%,人参皂苷Rb1质量分数的RSD=1.04%,3种皂苷质量分数之和的RSD=0.81%。结果表明,在测量时间10 h 内,样品溶液稳定。

  2.4 正交实验的结果 表2中极差R值表明,影响因素主次为D>A>C>B。表3的方差分析结果表明,影响因素主次为C>D>A>B。每次提取时间(P<0.005)和重复提取次数(P<0.05)对提取工艺有显著的影响。使用6~10倍于药材量的50%~70%的乙醇溶液为提取溶剂,对提取物中皂苷的含量影响不显著(P>0.05)。但是,对于人参和三七这样贵重药材,为了增加浸膏的产量和皂苷含量,减少水溶性杂质,增加醇溶性物质,使用10倍于药材量的70%的乙醇比较好。因此,实验得到的最佳工艺条件应为A3B3C3D3,即用10倍于药材量的70%乙醇水溶液,提取3次,每次提取2 h。

  2.5 提取工艺的验证 精密称量按处方比例混合的人参和三七药材粉末45 g,共3份,采用优选的最佳工艺条件,进行提取工艺的验证。为了考察用70%乙醇提取的效果,增加了第4次用10倍于药材量的水再提取1 h。提取液按“2.2”项下方法分别处理,并按照“2.3.1”项下的条件,测量三七皂苷R1、人参皂苷Rg1和Rb1的峰面积。按“2.3.3”项下的回归方程计算3种皂苷及它们之和的平均质量分数和相对标准偏差(RSD%)。表4结果表明,优化的A3B3C3D3工艺条件具有可行和较好的重现性。

  另外,精密称取人参药材粉末2 g,共3份,分装于滤纸筒内,置于索氏提取器内,加氯仿150 ml,回流提取3 h,取出纸筒,挥发除去氯仿,药渣连同纸筒一起放入100 ml锥形瓶中,加50 ml用水饱和的正丁醇,放置过夜,称重, 超声处理30 min,冷至室温,称重,用水饱和的正丁醇补充减失重量,滤过,精密量取续滤液25 ml,置于蒸发皿中,在水浴上蒸发除去正丁醇,残留物用甲醇溶解,转移到10 ml量瓶中,用甲醇稀释至刻度,作为人参药材供试溶液。再精密称取三七药材粉末0.8 g,共3份。同法处理,制备成三七药材供试溶液。分别精密量取人参、三七药材供试溶液10 μl, 注入高效液相色谱仪,按照“2.3.1”项下的条件,测量3种皂苷的峰面积。按“2.3.3”项下的回归方程计算3种皂苷及它们之和的平均质量分数。按照处方比例计算,人参和三七混合药材中三七皂苷R1的质量分数为0.45%,人参皂苷Rg1和Rb1分别为2.65%和1.94%,3种皂苷之和为5.04%(见表5)。超声提取法被认为是提取率最高的一种方法[10]。本试验用10倍于药材量的70%乙醇提取3次,每次2 h。提取物中3种皂苷的质量分数之和为5.17%(见表4),略高于超声提取法的皂苷含量,可认为人参和三七的皂苷成分基本提取完全。

  表4 提取工艺的验证结果 表5 人参、三七药材中皂苷含量

  3 讨论

  本研究选用乙醇回流提取法,用正交实验优选提取工艺,以10倍于药材量的70%乙醇水溶液回流提取3次,每次2 h。标志性皂苷成分三七皂苷R1,人参皂苷Rg1和Rb1的质量分数为药材的5.17%,为总皂苷的99.36%,人参和三七的皂苷成分基本提取完全。所选工艺条件已应用于工业放大生产试验,效果良好。

  在验证实验中增加了第4次用水提取1 h。用水作溶剂,有利于丙二酰基类皂苷的提取(人参皂苷Rb1,Rb1,Rb1,Re等)[11]。但是,水溶性杂质增多,提取液难以过滤,浓缩费时。要不要用水提取第4次,取决于制剂工艺的需要:如果提取规模小,或者需要控制水溶性杂质和出膏率,无需用水提取第4次;如果大规模生产,人参和三七用量大,可以用水提取第4次,提取液浓缩后,调成弱碱性,使丙二酰基类皂苷脱去酰基,变成相应的人参皂苷,再用乙醇溶出皂苷,沉淀除去杂质,以便充分利用人参和三七贵重药材。

  目前,已从人参中分离鉴定了46种单体人参皂苷[12],三七含有总皂苷类成分,且大部分皂苷与人参皂苷类成分相同[13]。提取含人参和三七的中药复方药材,其评价指标常用标志性成分人参皂苷。当然,使用的人参皂苷和三七皂苷作为对照品的种类越多,分析结果的代表性会越强,分析成本也越高。本研究选用三七皂苷R1,人参皂苷Rg1和Rb1 为对照品,采用高效液相色谱法测定提取物中3种皂苷的含量,以3种皂苷含量的和作为评价指标,筛选正交实验的最佳工艺条件,具有较好的代表性,便于在生产中使用。

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