蚂蝗抗凝血酶活性物质提取工艺改进

　　2.3.3 双缩脲比色法测水蛭提取液中蛋白质含量精密量取水蛭提取液2 ml，分别加人4 ml双缩脲试剂后在室温下放置30 min，置于540 nm波长处比色，测定其吸光度值。代入线性方程，计算蛋白质含量，进而得出水蛭提取液中蛋白质的总含量。

　　2.4 水蛭素比活力的计算根据所测得的水蛭素活性与蛋白质含量就可以计算出水蛭素的比活力，计算公式为：水蛭素比活力(ATU·mg-1)=水蛭素总量(ATU)/蛋白质总含量(mg)。表1 因素水平

　　2.5 实验结果以水蛭素含量和蛋白质含量来计算水蛭素比活力为综合评价指标，采用SPSS13.0数据处理系统进行方差分析。由表2可知因素C的极差最小，也就是对本试验的影响最小，所以以此项为误差项进行方差分析。结果见表3。

　　根据正交实验结果、直观分析及方差分析结果可见各因素对水蛭素得率影响的顺序为：A>B>D>C。由表3可知，A和B两项因素的P值小于0.05，对实验结果影响显著，因素D的P值大于0.05，说明因素D对实验因素影响不显著。因此因素A和B为主要因素，D和C因素为次要因素。因此，本实验的最佳的提取工艺为：A3B3D2C2，即在70℃，15倍剂量的条件下提取两次，每次30 min为最佳的提取工艺。　　表2 L9(34) 正交实验方案及结果

　　3 讨论

　　通过本实验的研究表明，合理地利用正交实验不仅省时、省力，还可以达到很好的实验效果。使用SPSS统计软件包对L9(34)正交实验结果进行数据处理，只要按正交表的设计格式输人实验数据，便可获得所需的统计结果。其操作方便、直观、快捷，结果准确。此法也可用来处理其他正交实验的数据。表3 方差分析结果

　　以往的文献报道多以提取物总氮提取率、水蛭素含量或抗凝血作用作为提取工艺筛选的考察指标，但往往都是不够全面或敏感性太低。为此，本实验以测得的水蛭素含量结合水蛭提取液中蛋白质的含量计算出水蛭素的比活力作为考察指标对提取工艺进行了优化。结果表明，在70℃下，以15倍剂量的生理盐水分两次提取，每次30 min可获得较好的提取效果。

【参考文献】
  　[1] 国家药典委员会.中国药典，Ⅰ部[S].北京：化学工业出版社，2005：57.

　　[2] 刘丽芳，金蓉鸾，徐国钧，等.中药水蛭经炮制后成分变化研究[J].中成药，2001，23(13):880.

　　[3] 董晓云，饶高雄，林亚明，等.以抗凝血活性指标筛选水蛭的提取工艺[J].云南中医学院学报，2002,25(3):23.

　　[4] 文洪宇，李 洪，陈媛媛，等.酒火炙水蛭的生物活性考察[J].中国药房，2007，18(18)：1372.