液-质联用选择离子质谱法测定降糖中成药中添加格列本脲的含量

　　2.3.2 供试品溶液的制备 取本品装量差异项下的内容物，研细，取粉末约0.3 g，精密称定，置50 ml量瓶中，加入甲醇约20 ml，超声处理30 min，放冷，加甲醇稀释至刻度，摇匀，过滤，再精密吸取续滤液5 ml置50 ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。供试品LC-MS图谱见图3～4。

　　2.3.3 测定法 精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5 μl，分别注入液相色谱仪，测定，即得。供试品Lc-MC图谱见图3～4。图3表明平糖宝胶囊中非法添加格列本脲，图4表明糖乐胶囊中不含格列本脲。图3 供试品平糖宝胶囊LC-MS图谱图4 供试品糖乐胶囊LC-MS图谱

　　2.4 方法学考察

　　2.4.1 线性关系考察精密称取格列本脲对照品适量，加甲醇制成每毫升含0.8 μg格列本脲的溶液，即得。分别精密吸取该溶液1，2，3，5，7，10 μl，注入液相色谱仪，测定峰面积值。结果对照品峰面积Y与其进样量X(ng)之间呈良好的线性关系，线性范围及回归方程见表3，回归曲线见图5。相关系数r=0.999 7表明线性良好。表3 标准曲线结果图5 格列本脲标准曲线图

　　2.4.2 精密度实验精密吸取供试品(批号：20040908)溶液，连续进样实验5次，记录格列本脲峰面积积分值。结果见表4。RSD=1.04%，结果表明精密度良好。表4 精密度实验结果

　　2.4.3 稳定性实验精密吸取供试品(批号：20080908)溶液，分别于0，3，6，9，12 h进样，记录格列本脲峰面积积分值。结果见表5，RSD=0.84%。结果表明供试品溶液在12 h内稳定。表5 稳定性实验结果

　　2.4.4 重复性实验取供试品(批号：20080908)5份，分别按[含量测定]项下方法操作并测定含量。结果见表6。格列本脲含量的平均值为0.523mg/粒，RSD为2.86%。表明实验重复性较好。表6 重复性实验结果

　　2.4.5 回收率实验采用加样回收法，精密称取已知格列本脲含量的供试品(批号：20080908)5份，分别精密加入格列本脲对照品适量，按[含量测定]方法测定，计算回收率。结果见表7。表7 回收率实验结果

　　2.4.6 样品含量测定按上述“2.3”项下方法操作，分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5 μl ，注入液相色谱仪，测定，即得。结果见表8。表8 含量测定结果

　　本文建立的LC-MS方法，采用选择性离子检测(SIM)，试验结果表明，样品中杂质对格列本脲无干扰，样品峰形良好，最低检测限达到0.8ng，平均回收率为97.74%，并且样品前处理程序简单，结果准确，专属性好。因此本方法为打击在降糖中成药中擅自添加西药成分格列本脲的违法行为提供了有利的技术依据。

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