松花粉总黄酮对四氯化碳所致小鼠急性肝损伤的保护作用

【摘要】  目的研究松花粉总黄酮对四氯化碳所致小鼠急性肝损伤的保护作用，探讨其疗效机制。方法松花粉总黄酮予小鼠连续灌胃给药10 d，用CCl4造成小鼠急性肝损伤，测定小鼠血清中谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)的含量，以及肝组织中超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)的水平，观察光镜下小鼠肝组织的病理变化。结果松花粉总黄酮高、中、低各剂量组均能抑制小鼠腹腔注射CCl4引起的急性肝损伤所致的ALT和AST的升高，同时能升高肝组织中SOD的活性，并能降低MDA的含量;减轻肝组织坏死程度。结论松花粉总黄酮对四氯化碳所致的小鼠急性肝损伤具有保护作用，其保护机制可能与其抗脂质过氧化有关。

【关键词】  松花粉总黄酮; 急性肝损伤; 四氯化碳

　松花粉药名松黄，是松科植物马尾松Pinus massoniana，油松P. tabulaeformi或同属数种植物于春季花刚开时，采摘花穗晒干收集，除去杂质所得的淡黄色细花粉，其成分稳定、不含激素，是花粉产品中的佼佼者。松花粉是我国传统食药兼用的花粉品种，神农本草、本草纲目等多种医籍中均有记载，有润心肺、益气、祛风止血、养颜益志、强身健体的功能[1]。作为古老的药源和营养源，国家卫生部近年已确认松花粉为新资源食品，并将其列为普通食品管理[2]。松花粉中的多种酶、核酸、有机酸、黄酮等生物活性物质能调节人体机能，具有延缓衰老，促进新陈代谢的功能，对于保健及功能药物的开发具有重要意义[3]。

　　本研究采用CCl4小鼠急性肝损伤模型，运用酶活力测定，抗脂质过氧化物测定以及形态学观察等方法，研究松花粉总黄酮(Flavone in Pinus Massoniana pollen，FPMP)对小鼠急性肝损伤的保护作用并探讨其保护机制。

　　1 材料

　　1.1 药物 马尾松花粉采自云南腾冲高黎贡山南麓。将松花粉晒干后冷冻超微粉碎，石油醚回流脱脂，95%乙醇回流浸提，提取后减压回收乙醇，浸膏加适量水溶解，取水层浓缩后加入已处理好的聚酰胺柱中洗脱，至洗脱液中不含黄酮类成分为止，回收乙醇，水浴上挥干即得松花粉总黄酮，以芦丁为标准测定黄酮含量为67.80%。松花粉总黄酮用双蒸水配成所需浓度。

　　1.2 试剂 联苯双酯滴丸(广州星群药业股份有限公司);四氯化碳(天津市四通化工厂);鲁花纯正花生油;ALT，AST，MDA，SOD试剂盒(南京建成生物工程研究所)。

　　1.3 仪器 高速冷冻离心机(BECKMAN仪器公司J2-HS722);生化分析仪(日本日立公司Hitachi 7600-020);分光光度计(南京第四分析仪器有限公司);旋转蒸发仪(上海予华仪器有限公司);电热恒温水浴箱(杭州中拓仪器有限公司)。

　　1.4 动物 60只雄性昆明种小鼠，体质量(20±2)g，南方医科大学医学动物实验中心提供。

　　2 方法

　　2.1 模型建立[4，5]取昆明种小鼠60只，随机分为6组，即空白对照组、联苯双酯组、CCl4模型组及松花粉总黄酮高、中、低剂量组。联苯双酯组灌胃给予联苯双酯混悬液150 mg·kg-1;松花粉总黄酮3个剂量组分别灌胃给予松花粉总黄酮15，30，60 mg·kg-1。空白对照组和CCl4模型组给予同等量的蒸馏水。连续10 d后除空白对照组外其余各组均腹腔注射0.5% CCl4油溶剂0.1 ml·10 g-1(此即CCl4的给药方式，为一次性给药造成急性肝损)。禁食24 h后摘眼球取血，静置30 min， 3 000 r·min-1离心10 min后分离血清，待测血清中AST及ALT含量。取肝组织，用生理盐水洗去残血并用滤纸滤干，剪成小块。称取100 mg，加预冷生理盐水0.9 ml制成10%匀浆，待测肝组织SOD活性和MDA的含量。取肝大叶相同部位的一小块肝组织固定于10%福尔马林，做病理切片检查。

　　2. 2 生化检测 分离得到的各组小鼠血清，按照试剂盒说明测定ALT和AST的活力。10%肝组织匀浆4℃ 3 500 r·min-1离心10min后取上清液，按照试剂盒说明测定SOD活性和MDA的含量。

　　2. 3 形态学观察 所取小鼠肝组织用10%福尔马林固定，制备肝组织切片，HE染色，普通光镜下观察肝组织病理结构改变。

　　2. 4 统计方法 组间比较采用Cochran & Cox近似t检验，数据用±s表示，P<0. 05为差异显著，P<0. 01为差异极显著。