北豆根总碱软胶囊的制备及质量控制

　　3.4 北豆根总碱含量测定[3]

　　3.4.1 比色原理溴甲酚绿为一酸性染料，它的显色与pH值有关，溴甲酚绿在无水甲醇(pH=6)的条件下，可与北豆根总碱直接络合成绿色化合物，用于比色测定。

　　3.4.2 检测波长的选择分别称取一定量的北豆根总碱软胶囊内容物(约相当于总碱15 mg)和空白制剂的内容物置10 ml容量瓶中，加入无水甲醇至刻度，超声提取30 min，补足失去的甲醇量，过滤。取续滤液0.2 ml 置10 ml容量瓶中，加入0.1%溴甲酚绿溶液0.2 ml ,用无水甲醇定容，在200～700 nm进行扫描。软胶囊内容物的甲醇提取液在620 nm处有最大吸收，而空白制剂没有吸收。说明辅料对测定无影响。

　　3.4.3 线性关系考察精密称取蝙蝠葛碱对照品2.0 mg，置10 ml容量瓶中，加无水甲醇溶解并定容作为对照品溶液。分别精密称取对照品溶液0.3，0.5，0.8，1.0，1.2，1.5，2.0 ml，置10 ml容量瓶中，加入0.1%溴甲酚绿溶液0.2 ml，于620 nm处测定吸收度，随行试剂空白。以蝙蝠葛碱浓度C对吸收度A进行线性回归，得标准曲线方程：C=49.82A-0.84，r=0.999 8(n=7)，线性范围为6～40 μg·ml-1。

　　3.4.4 回收率实验取经过含量测定的北豆根总碱(含量92.71%)约15 mg,分别精密称定5份置10 ml容量瓶中，按处方比例加入辅料，用自动涡流混合器混匀。加入无水甲醇10 ml，超声提取30 min，补足失去的甲醇量，过滤。取续滤液0.2 ml置10 ml容量瓶中，加入0.1%溴甲酚绿溶液0.2 ml ,用无水甲醇定容。在620 nm处测定吸收度。随行试剂空白。根据标准曲线方程计算北豆根总碱的量和回收率。结果见表3。　　表3 北豆根总碱回收率实验结果

　　3.4.5 样品含量测定 按北豆根总碱软胶囊的最佳处方，制备3批样品，取3种批号样品各40 mg (约含总碱10 mg)，置50 ml容量瓶中，用无水甲醇定容，超声提取30 min，补足失去的甲醇量，过滤。精密吸取续滤液1.0 ml置10 ml容量瓶中(浓度为2%)，加入0.1%溴甲酚绿溶液0.2 ml ,用无水甲醇定容。在620 nm处测定吸收度，随行试剂空白。根据标准曲线方程计算北豆根总碱的量。结果3批样品的标示量分别为98.2%，99.6%，100.3%，符合方法学要求。

　　3.5 蝙蝠葛碱含量测定[4]

　　3.5.1 色谱条件色谱柱为Discovery-C18(5 μm，4.6 mm×250 mm);流动相为乙腈∶水∶磷酸=16∶84∶0.15(V∶V∶V );流速0.5 ml·min-1;波长208nm;柱温为室温;进样量20 μl;理论塔板数：2300。

　　3.5.2 干扰实验分别称取一定量的北豆根总碱软胶囊内容物(约相当于总碱15 mg)和空白制剂的内容物置25 ml容量瓶中，加入无水甲醇至刻度，超声提取30 min，补足失去的甲醇量，过滤。取续滤液1.0 ml，置10 ml容量瓶中，挥干甲醇，用流动相溶解并定容。按色谱条件检测。空白制剂在25 min时无吸收峰，说明辅料对测定没有影响。色谱见图1。

　　3.5.3 线性关系考察 精密称取北豆根对照品5.0 mg，置25 ml容量瓶中，用流动相溶解并定容，作为对照品溶液。分别精密吸取对照品溶液0.5，1.0，1.5，2.0，3.0，4.0，5.0 ml，置10 ml容量瓶中，用流动相稀释至刻度，按上述条件进行检测，以峰面积(A)对浓度(C)进行回归，得回归方程A=1.53×108 C +0.14×104 ，r=0.999 8(n=7),线性范围为0.01～0. 1mg·ml-1。a-对照品 b-样品 c-阴性样品图1 高效液相色谱图

　　3.5.4 回收率实验取经过含量测定的北豆根总碱(含蝙蝠葛碱48.06%)约15 mg,分别精密称定5份置25 ml容量瓶中，按处方比例加入辅料，用自动涡流混合器混匀。加入无水甲醇至刻度，超声提取30 min，补足失去的甲醇量，过滤。取续滤液1.0 ml置10 ml容量瓶中，挥干甲醇，用流动相溶解并定容。按上述色谱条件测定。根据标准曲线方程计算蝙蝠葛碱的量和回收率。结果见表4。表4 蝙蝠葛碱回收率实验结果

　　3.5.5 样品含量测定 取3种批号样品40 mg (约含蝙蝠葛碱5 mg)，置25 ml容量瓶中，用无水甲醇定容，超声提取30 min，补足失去的甲醇量，过滤。精密吸取续滤液2.0ml置10 ml容量瓶中，(浓度为4%)，挥干甲醇，用流动相溶解并定容。按上述色谱条件测定。根据标准曲线方程计算蝙蝠葛碱的量。取3种批号样品40 mg (约含总碱10 mg)，结果3批样品的标示量分别为99.1%，100.5%，99.6%，符合方法学要求，其中蝙蝠葛碱含量不低于北豆根总碱的45.0%。

　　4 讨论

　　北豆根提取物味苦、疏水性强、对光热不稳定，适宜制成软胶囊。建立北豆根总碱软胶囊的质量标准，需要解决两个问题：一是能否完全地把北豆根总碱从内容物中提取出来;二是辅料是否对测定造成影响。本实验在参考北豆根提取物含量测定方法的基础上，很好地解决了上述两个问题，完成了北豆根总碱软胶囊的含量测定。

【参考文献】
  　[1] 时 军，程 怡.辅料在软胶囊剂型中的应用[J].中医药学刊，2003，21(9)∶1429.

　　[2] 张亚中，张 彤，陶建生.中药软胶囊的研究进展[J].中成药，2006，28(6)∶871.

　　[3] 张 怡，王爱华.北豆根气雾剂质量标准研究[J].中草药，2002，33(11)∶999.

　　[4] 史自东，刘 博.HPLC法测定蝙蝠葛酚性碱片中蝙蝠葛碱[J].中草药，2006，37(9)∶1347.