天钩方治疗肾性高血压大鼠的实验研究
作者：杨蕾，李红宇，宓穗卿，王宁生
【摘要】 目的观察天钩方对肾性高血压大鼠的降压作用，并探讨其可能的作用机制。方法应用“两肾一夹法”(2K1C)建立大鼠肾性高血压模型，观察不同剂量天钩方对模型大鼠血压、血清超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和血清血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)、一氧化氮(NO)、一氧化氮合酶(NOS)的影响。结果天麻钩藤制剂各剂量组均能明显降低模型大鼠的血压，显著升高模型大鼠血清SOD、GSH-Px和NO水平，明显降低血清中AngⅡ和MDA含量，NOS水平。结论天麻钩藤制剂降压作用确切，其作用机制可能与其具有显著的抗氧化作用改善内皮功能有关。
【关键词】 天钩方; 肾性高血压; 抗氧化; 一氧化氮; 血管紧张素Ⅱ
Abstract：ObjectiveTo investigate the effect of Tiangou Decoction on antihypertension in renovascular hypertension rats and its possible mechanism.
MethodsTwo-kidney, one-clip (2K1C) renovascular hypertension was induced in Sprague-Dawley rats, the effect of different doses of Tiangou Decoction on blood pressure, serum superoxide dismutase(SOD), malondialdehyde (MDA), glutathione peroxidase(GSH-Px), angiotensinⅡ(AngⅡ) nitric oxide(NO), nitric oxide synthase(NOS) of experimental rat model were investigated.
ResultsDifferent doses of Tiangou Decoction significantly reduced the blood pressure level, increased serum superoxide dismutase(SOD) and glutathione Peroxidase(GSH-Px) activities, increased serum nitric oxide(NO) and nitric oxide synthase(NOS) contents, and decreased angiotensinⅡ(AngⅡ),malondialdehyde (MDA) contents.
ConclusionTiangou Decoction has significant effect of antihypertension. Its therapeutic mechanism may be related to the antioxidation function and improving endothelial function.
Key words：Tiangou Decoction; Renovascular Hypertension; Antioxidation; Nitric oxide; AngiotensinⅡ
高血压病的发生和演变是多因素、多层次交互作用的复杂过程，近期研究发现，氧化应激介导的血管内皮功能损伤、一氧化氮等血管内皮舒张因子失活是高血压病进行性发展及靶器官损害的重要机制之一，因此保护血管内皮、抗氧化是近期评价抗高血压药物疗效的一个重要途径。天钩方是在经典平肝潜阳复方天麻钩藤饮的基础上化裁而来，由天麻、钩藤、葛根、杜仲等中药材组成，本文拟采用“两肾一夹”法建立肾性高血压动物模型，探讨该方对模型动物的降压作用及其产生的可能机制。
1 材料与仪器
1.1 动物SD大鼠54只，SPF级，雄性，体质量(200±20)g，由广东省实验动物中心提供，动物合格证号：粤监证字2008D007。
1.2 药物天钩方(天麻15 g，钩藤15 g，葛根15 g，杜仲10 g)购自广州中医药大学大药房，经生药学鉴定为合格药材，按照常规方法煎煮，并浓缩成所需浓度的浓缩药液备用。
1.3 试剂与仪器SOD，MDA，GSH-Px，NO，NOS，iNOS测定试剂盒，均由南京建成生物技术有限公司，批号：20090911。AngⅡElisa试剂盒，由ALD公司提供，批号0905。无创血压测量仪(ALC-NIBP型)，上海奥尔科特生物科技有限公司;UV-260型紫外/可见光光度计，日本Shimadaz(岛津)公司;多功能酶标仪，SPECTRA FLUOR PLUS，澳大利亚;LXJ-IIB型低速大容量多管离心机，上海安亭科学仪器厂。
2 方法
2.1 造模、分组与给药大鼠以10%的水合氯醛(0.4 ml/100 g)腹腔注射麻醉后的大鼠仰卧固定于手术台上，剪去腹部体毛，5%碘伏消毒，75%酒精脱碘，盖上孔巾。沿腹正中线作手术切口打开腹腔，按无菌操作，小心钝性分离出左肾动脉，穿入无菌丝线，把直径为0.25 mm的针灸针与肾动脉血管长轴紧贴平行放置，用无菌丝线扎紧肾动脉和针灸针后抽出针灸针，结果造成单侧肾动脉狭窄，对侧肾脏和动脉不触及。假手术组除结扎肾动脉外，其余手术操作均同上。术后3天内青霉素(3×104U/d)腹腔注射预防感染，造模4周后尾套法测量大鼠血压，每次重复3次取其均值，以尾动脉收缩压超过140 mmHg的大鼠作为模型大鼠。按血压高低分层后随机分为5组，每组8只，即模型对照组，阳性药物对照组，天钩方高，中，低剂量组，另设假手术组，共6组。按动物体表面积换算成等效剂量，天钩方高剂量组予20 g/kg体质量，中剂量组予10 g/kg体质量，低剂量组予5 g/kg体质量，阳性组给予依那普利1.8 mg/kg体质量，给药体积均为5 ml/kg体质量，假手术组和模型组给予等体积的生理盐水，均为灌胃给药，2次/d，连续8周。
2.2 血压测定采用尾动脉脉搏测压法，在大鼠安静状态下进行血压测定，连续测3次收缩压，取平均值作为测压结果。正式实验前，适应性测压约2周。待大鼠适应环境，血压稳定后，开始正式实验。
2.3 样本采集大鼠末次给药30 min后，腹主动脉取血10 ml，4℃ 1 200×g离心10 min，分离血清，-70℃冰箱保存待测。
2.4 指标检测 血清SOD采用黄嘌呤氧化酶法测定;MDA采用TBA(硫代巴比妥酸)法测定;GSH-Px采用酶促反应法测定;NO采用硝酸还原酶法测定;NOS采用TBA(硫代巴比妥酸)法测定，AngⅡ采用Elisa法测定，均按试剂盒说明书操作。
2.5 统计学分析数据均以±s表示，应用SPSS13.0统计软件进行统计学处理，组间比较采用单因素方差分析One-Way ANOVA。