紫玉盘提取物体外抗肿瘤活性的实验研究

                  作者：卢汝梅，李兵，苏醒，钟振国，张雯艳

【摘要】  目的研究紫玉盘提取物的体外抗肿瘤活性。方法紫玉盘乙醇总提取物用系统溶剂分离法分得极性不同部位,采用MTT法测定总提取物及各部位对宫颈癌细胞株Hela、人胃癌细胞株SGC7901、人肝癌细胞株Bele7404增殖的抑制活性。结果紫玉盘总提取物及各部位随着浓度不同，对3种肿瘤细胞株增殖的抑制率各不同。结论紫玉盘总提取物及各部位有显著的体外抗肿瘤活性。

【关键词】  紫玉盘;提取物;抗肿瘤活性

　紫玉盘Uvaria microcarpa Champ.ex Benth是番荔枝科紫玉盘属植物，药用全株，具有祛风除湿、行气健胃、止痛、化痰止咳之功效，广西民间用其根来治疗风湿痛、跌打损伤和腰腿痛等症，其叶用于止痛消肿[1,2]。近二十年来的研究表明，紫玉盘同属植物有显著的抗肿瘤作用，但关于紫玉盘的研究报道较少，仅报道从其种子中分得几个番荔枝内酯类和生物碱类成分 [3,4]，对药材的主要药用部位茎的药理作用研究报道甚少,因此很有必要对其药理作用进行系统深入的研究。本实验采用MTT法测定紫玉盘乙醇总提取物及各部位对宫颈癌细胞株Hela、人胃癌细胞株SGC7901、人肝癌细胞株Bele7404增殖的抑制活性。

　　1材料与仪器

　　1.1紫玉盘提取物紫玉盘采于广西南宁，经广西中医学院刘寿养副教授鉴定为番荔枝科植物紫玉盘Uvaria microcarpa Champ. ex Benth。紫玉盘茎用乙醇提取得其总提取物(以下简称UAAE), 总提取物经系统溶剂分离法处理得到石油醚部位(以下简称UPE)、氯仿部位(以下简称UCE)、醋酸乙酯部位(以下简称UEE)、正丁醇部位(以下简称UBE)和乙醇部位(以下简称UAE)。临用前以蒸馏水溶解,无菌过滤后备用。

　　1.2肿瘤细胞株宫颈癌细胞株Hela、人胃癌细胞株SGC7901购自上海细胞生物研究所细胞库，人肝癌细胞株7404由广西医科大学药学院药理教研室提供。

　　1.3试剂MTT(四甲基噻唑蓝)为德国Sigma公司产品;FBS(胚胎牛血清)为美国Hyclone公司产品;RPMI1640和DEME培养基为GIBCO公司产品;Trypsin(胰蛋白酶)由天津市灏洋生物制品有限责任公司提供;DMSO由天津汇英化学试剂有限公司提供。

　　1.4仪器Thermo Forma型CO2培养箱，美国赛默飞世尔科技。Clympus型倒置显微镜，日本产。Biocell型酶标仪，奥地利产。3001型培养皿，美国产。HV-50自动高压灭菌器，日本产。

　　2方法

　　2.1MTT法测定在96孔培养板(NUNC)中每孔加入200 μl(含有5 000个/ml肿瘤细胞)含10%FBS的RPMI1640培养液，细胞置37℃，10%CO2培养24 h后，实验组分别加入最终浓度为10，20，40 μg/ml提取的培养液，对照组则加入等体积溶剂的培养液，每组4孔。置37℃，10%CO2培养5 d后，弃去上清液，加入200 μl/孔新鲜配置的含0.2 mg/ml MTT的无血清培养液，37℃继续培养4 h，弃上清液，加入200 μl DMSO，振荡混匀后，在酶标仪上以波长为550 nm，参比波长为450 nm测定OD值，重复3次，按下式计算药物对肿瘤细胞生长的抑制率。

　　2.2药物对肿瘤细胞生长的抑制率的计算方法[5]肿瘤细胞生长抑制率(%)=(1-实验组平均OD值/对照组平均OD值)×100%。

　　2.3统计学方法所有的测定指标均采用均数加减标准差表示，用PEMS软件进行分析，计算相应的统计参数，两组间的均数比较采用t检验。以P<0.05，P<0.01表示有统计意义。

　　3结果

　　3.1总提取物(UAAE)对肿瘤细胞的抑制作用UAAE对宫颈癌细胞株Hela、人胃癌细胞株SGC7901、人肝癌细胞株Bele7404的增殖均有显著的抑制作用，且抑制作用呈剂量依赖关系。UAAE对人胃癌细胞株SGC7901增殖的抑制作用最强。结果见表1。