蛇菰内生菌的抑菌作用及活性有效成分分析

　　3结果

　　3.1筒鞘蛇菰内生菌发酵浓缩液对细菌的体外抑菌作用以牛津杯法对4种细菌做抑菌实验。实验结果见表1，共有20种发酵液对细菌有抑菌作用。其中SG003在发酵过程中颜色发生变红，根据颜色由红至淡黄色变化分别命名为SG003A，SG003B，SG003C，SG003D。表1筒鞘蛇菰内生菌发酵浓缩液对细菌的抑菌效果“-” 代表无抑菌圈;“+” 代表抑菌圈为1.000~1.500 cm范围内;“++” 代表抑菌圈为1.500~2.000 cm范围内;“+++” 代表抑菌圈为2.000~2.500 cm范围内;“*” 指在12 h后生长不明显，其抑菌效果为24 h所做记录

　　3.2筒鞘蛇菰内生菌发酵浓缩液萃取物对4种细菌的抑菌作用由表1看出SG047抑菌作用最佳，其扩大培养的发酵液用乙酸乙酯、正丁醇萃取浓缩后，将乙酸乙酯相、正丁醇相、水相浸膏，定量测量对细菌的最小抑菌浓度(MIC)。得到乙酸乙酯相对4种细菌有明显抑菌作用，而正丁醇相、水相无抑菌现象。乙酸乙酯相抑菌结果见表2。表2显示，乙酸乙酯相浸膏对大肠杆菌的MIC为10-5g/ml，对绿脓杆菌、枯草芽胞杆菌、金黄色葡萄球菌的MIC均为10-4g/ml。

　　3.3筒鞘蛇菰内生菌SG047萃取后乙酸乙酯萃取相浸膏抑菌实验照片将乙酸乙酯萃取相浸膏稀释成10-2，10-3，10-4，10-5(g/ml)，空白组采用等体积纯乙酸乙酯。图1为筒鞘蛇菰SG047乙酸乙酯萃取相浸膏对细菌抑菌实验照片，其中左图为对大肠杆菌的抑菌作用，右图为枯草芽孢杆菌的抑菌作用。表2筒鞘蛇菰内生菌SG047萃取后其乙酸乙酯相抑菌试验及最小抑菌浓度图1筒鞘蛇菰内生菌SG047乙酸乙酯萃取浸膏对大肠杆菌和枯草芽孢杆菌的抑菌作用

　　3.4薄层色谱对乙酸乙酯相进行薄层色谱检测，展开剂三氯甲烷∶甲醇按照90：13进行展开时。效果最佳。硅胶薄板上有4个点，即至少有4中成分。依次从下到上，通过测量得出4个点的Rf值非别为：0.167，0.433，0.617，0.783。

　　3.5化学鉴定反应图2为盐酸-镁粉反应和salkowski 反应。通过观察颜色可以推出乙酸乙酯相中含有黄酮、黄酮醇、二羟黄酮及其醇类化合物和甾体皂苷类物质。图2筒鞘蛇菰内生菌SG047萃取后其乙酸乙酯萃取相浸膏化学鉴定反应

　　4结果

　　对49种内生菌发酵产物的抑菌实验可以得出，18株内生真菌发酵产物对细菌有一定的抑菌作用。其中SG047对4种细菌均有较强的抑菌效果。SG047扩大培养的发酵液经萃取后的抑菌试验可以看到，其有效抑菌活性物质在醋酸乙酯相中。其中醋酸乙酯相浸膏对大肠杆菌的MIC为10-5g/ml，对绿脓杆菌、枯草芽胞杆菌、金黄色葡萄球菌的MIC均为104 g/ml。通过盐酸-镁粉反应和salkowski 反应。得出蛇菰内生菌SG047菌株发酵液的醋酸乙酯相中含有黄酮、黄酮醇或二羟黄酮及其醇类化合物和甾体皂苷类物质。

【参考文献】
  　[1]刘斌，石任兵，周素蓉. 苦参汤有效部位总黄酮含量测定方法研究[J]. 中国实验方剂学杂志，2004，10(6)：24.

　　[2]吴立军. 中药化学[M].北京：中国医药科技出版社，2006：167.