冬葵果中总酚酸的含量测定

　　2.3标准曲线的制备精密吸取咖啡酸对照品溶液(浓度为0.031 2 mg/ml) 0.25，0.5，1.0，1.5，2.0 ，2.5，3.0和4.0 ml，置25 ml量瓶中，加无水乙醇至5 ml，加0.3%十二烷基硫酸钠2.0 ml及0.6%三氯化铁-0.9%铁氰化钾(1∶0.9)混合溶液1.0 ml，混匀，在暗处放置5 min，加0.1 mol/L盐酸溶液至刻度，在暗处放置20 min，以显色剂为空白，在700 nm波长处测定吸收度。以咖啡酸对照品取样量为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线，并进行线性回归，得回归方程为Y= 6.479 6X + 0.003 5， r= 0.999 8， n=8。结果表明，咖啡酸在0.007 8～0.124 8 mg范围内与吸光度呈良好的线性关系。

　　2.4样品溶液的制备精密称取冬葵果粉末2.5 g，置圆底烧瓶中，加70%乙醇50 ml，加热回流提取2h，过滤，用20 ml 70%乙醇分两次洗涤容器，洗液并入同一圆底烧瓶中，40℃减压回收至近干，以无水甲醇转移至25 ml量瓶中，超声，无水甲醇定容，精密量取5.0 ml于10.0 ml量瓶，加无水甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，避光备用。

　　2.5测定法精密吸取样品溶液0.5 ml置25 ml量瓶中,照“2.3”项下的方法,自“加无水乙醇至5 ml”起，依法测定吸收度,从标准曲线上读出样品溶液中咖啡酸的重量(mg),计算,即得。

　　2.6精密度实验精密吸取样品溶液0.5 ml置25 ml量瓶中,照含量测定法,连续测定6次,结果RSD=0.46%,表明本方法的精密度良好。

　　2.7稳定性实验精密吸取样品溶液0.5ml置25 ml量瓶中,照含量测定法,分别于0,15,30,45,60,75 min测定,结果RSD=2.72%,表明本品供试品溶液在75min内稳定性良好。

　　2.8重复性实验取同一批冬葵果粉末6份，每份约2.5g，精密称定，照样品溶液的制备方法，重复制备6份样品,照含量测定法，分别进行测定,结果RSD=1.94%,表明本方法的重复性良好。

　　2.9加样回收实验取同一批样品6份，每份约1.25 g，精密称定，精密加入约5 mg咖啡酸对照品，按供试品溶液制备方法制备样品，照含量测定法，分别进行测定,计算回收率，结果表明，咖啡酸的加样回收率为99.18%，RSD为1.54%。结果见表1,表明本法具有良好的回收率。

　　3结果与分析

　　样品测定取冬葵果粉末约2.5 g，精密称定，按供试品溶液制备方法制备样品，依法显色，测定，计算总酚酸的含量。结果见表2。

　　4结论

　　本课题组研究发现冬葵果中含有酚酸类成分，并采用反复硅胶加压柱色谱法、Sephadex LH-20色谱法、以及重结晶方法从中提取、分离、鉴定了其中主要有效成分之一——咖啡酸，咖啡酸具有止痛、抗炎症、抗肝毒、抗溃疡等作用，与冬葵果用于尿路感染有关，因此，本文首次以咖啡酸为对照品，对冬葵果中总酚酸进行了含量测定，该方法灵敏、简便、快速、准确可靠。 为合理、有效地开发、利用冬葵果药材奠定基础。表1样品加样回收实验结果表2冬葵果中总酚酸含量测定结果样品的制备需将样品提取液于40℃减压回收至近干，是由于如果温度过高，会使其中的咖啡酸等酚酸类成分破坏，故采用40℃低温回收溶剂。

【参考文献】
  　[1]国家药典委员会. 国家药典，Ⅰ部[S].北京：化学工业出版社，2005：76.

　　[2]中国医学百科全书蒙医学编委会.中国医学百科全书[M].上海：上海科学技术出版社，1992：213.

　　[3]吴寿金，赵泰，秦永琪.现代中草药成分化学[M].北京:中国医药科技出版社，2002： 1061.

　　[4]刁景丽，张桂琴，王晋.蒙药冬葵果宏量元素与微量元素测定[J].中国民族医药杂志，2005，3: 31.

　　[5]李增春，徐宁，杨利青，等. 蒙药冬葵果挥发油化学成分分析[J].中成药，208，30(6)：922.

　　[6]陈燕飞，刘乐乐，王玉华，等. 薄层色谱法鉴定冬葵子中阿魏酸[J].内蒙古医学院学报，　2008， 30(2)：115.