化痰通络法联合尿激酶溶栓对急性脑梗塞大鼠不同脑区炎性因子的影响

               作者：周震，张玉莲， 郭家奎，王占奎 ，刘爽，张琳琳

【摘要】  目的通过观察化痰通络法联合尿激酶溶栓对急性脑梗塞大鼠不同脑区炎性因子的影响，探讨其对大鼠脑缺血再灌注损伤的作用机制。方法SD大鼠136只，随机分为5组，即正常组、假手术组、模型组、尿激酶组、化痰通络法联合尿激酶组，采用自身栓子法制备大鼠大脑中动脉栓塞模型，分别给予中药灌胃及尿激酶溶栓，Elisa法检测化痰通络法联合尿激酶溶栓对急性脑梗塞后6 h，72 h，7 d,14 d脑组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素细胞-1β(1L-1β)、细胞黏附因子-1(ICAM-1)等炎性因子蛋白表达的影响。结果化痰通络法联合尿激酶溶栓能明显抑制TNF-α、1L-1β、ICAM-1蛋白的表达。结论中药联合溶栓可减少溶栓后缺血再灌注损伤，其机制可能与抑制相关炎性因子表达有关。

【关键词】  化痰通络法;溶栓;炎性因子;ELISA法;缺血再灌注

　溶栓治疗可以迅速恢复缺血脑组织血流，有效挽救缺血半暗带的功能。但同时带来的再灌注损伤可对病情及预后产生直接影响。再灌注损伤会引起一系列炎症反应，其中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素细胞-1β(1L-1β)、细胞粘附因子-1(ICAM-1)等炎性因子扮演重要角色。本研究采用化痰通络法联合尿激酶干预方式来探讨中药联合溶栓对缺血再灌注损伤，特别是对炎性因子等的影响，为扩大溶栓治疗的临床应用提供科学依据。

　　1材料与仪器

　　1.1动物选用250～300 g健康SD大鼠136只，8月龄，雌雄各半，清洁级，由军事医学科学院实验动物中心提供[许可证号SCXK-(军)2002-001]。大鼠饲养环境的室温为20～22℃，相对湿度为50%左右。

　　1.2试剂大鼠TNF-α ELISA检测试剂盒、大鼠1L-1β ELISA检测试剂盒、大鼠ICAM-1 ELISA检测试剂盒均购自美国ADL公司。

　　1.3仪器酶标仪(Mode1550型)采用美国BIO-RAD公司生产;紫外分光光度计(UV-240型)采用日本岛津;高速冷冻离心机(T-124型)采用意大利 Kontron Centrikon。

　　2方法

　　2.1分组与给药方法随机将大鼠分为5组，即正常组、假手术组、模型组、尿激酶组、化痰通络法联合尿激酶组(以下称中药组)。除正常组外，其余4组又分为6，72 h，7，14 d 4个时间点，每组每个时间点8只大鼠。中药组给予化痰通络法中药(天麻、胆南星、半夏、丹参、川芎、地龙、酒军)煎剂灌胃并结合小剂量尿激酶溶栓治疗;尿激酶组给予蒸馏水代替中药灌胃并结合小剂量尿激酶溶栓治疗。尿激酶采用大鼠尾静脉加速滴注NS 30 m1+UK2.7万U/kg(相当于70 kg人剂量的30万U)，1次/d，共用3 d。

　　2.2大鼠大脑中动脉栓塞模型制备首先进行栓子制备，随后参照张新江[1]、刘瑜等[2]法建立大鼠大脑中动脉栓塞模型。模型组、尿激酶组和中药组大鼠均造模。假手术组手术方法同模型制作，只在注射时以生理盐水0.3 ml代替栓子溶液。正常组未进行手术及造模。

　　2.3模型制备成功标准除正常组外其余各组均于术后2 h观察动物行为障碍的程度并进行评分，评分标准参考Bederson等[3]的方法。模型成功标准为出现确切的神经功能缺损症状。

　　2.4实验指标的检测方法 各组分别相应时间点经相应处理后断头取脑置于冰盘上，剥离缺血侧脑皮层、海马脑组织制成1%的脑组织匀浆，采用免疫组织化学法(Elisa法)检测大鼠脑组织TNF-α、IL-1β及ICAM-1的蛋白表达。

　　2.5统计学处理数据以±s表示，采用SPSS11.5医学统计学软件处理，对实验数据进行单因素方差分析。