不同莪术提取物对小鼠皮肤癌的药效研究

            作者：钟华，尹蓉莉 谢秀琼，周淑芳，文登福，任劲松，袁龙，陈金玉

【摘要】  目的研究不同莪术提取物对小鼠皮肤癌的药效。方法设计了二甲基苯蒽(DMBA)致小鼠皮肤癌动物模型，从对小鼠体质量增长的影响，抑瘤率，外周血常规检测，脾脏、胸腺指数4个方面进行了药效评价研究。结果莪术提取物对小鼠皮肤癌的药效明显。结论莪术超声提取物研究开发价值较大。

【关键词】  莪术提取物;超声法;水蒸气蒸馏法;皮肤癌

　莪术作为传统中药具有活血化瘀的功效。现代研究表明，其活性成分莪术醇、莪术酮、牻牛儿酮、β-榄香烯、姜黄素(Ⅰ) 、脱甲氧基姜黄素(Ⅱ) 和双脱甲氧基姜黄素(Ⅲ)等在抗病毒、抗肿瘤方面的确切疗效和作用,为其带来了广阔的发展空间和市场，其不仅能直接抑制、破坏肿瘤细胞和灭活病原体,而且还可以增强机体自身的免疫功能,从而促进机体对肿瘤和病毒的免疫反应[1，2]。现目前工业化生产主要采用水蒸气蒸馏法提取莪术挥发油类成分，其水溶液成分因长时间受热导致药用成分损失破坏。60%超声醇提法在不改变莪术有效成分结构的前提下，不仅可以提得挥发油类成分，还可以提得姜黄素类等醇溶性以及水溶性成分，且提取效率高，省工、省时、节能，使得中药提取既符合传统的中医药理论，又能达到提高有效成分的收率和纯度的目的。针对皮肤癌的适应证，我们设计了小鼠皮肤癌动物模型，从对小鼠体质量增长的影响，抑瘤率，外周血常规检测，脾脏，胸腺指数4个方面进行了药效评价研究，为制剂工艺研究提供了参考[3~6]。

　　1仪器与试药

　　BP211DAG电子天平(德国Sartorius)，SHZ型循环水真空泵(上海亚荣生化仪器厂)，KDM型控温电热套，DL-720D型数控超声波仪(昆山市超声仪器公司)，超声提取器(上海必能信)，micromax高速离心机(美国热电)。生理盐水,莪术挥发油,莪术水提药液,莪术醇提液,DMBA (二甲基苯蒽), GST-π多克隆抗体(NCL-GSTpi)购自于Novocastra公司，AP免疫试剂盘均购自Sigma公司，KM小鼠由实验动物中心提供。

　　2方法与结果

　　2.1小鼠皮肤癌模型试验

　　2.1.1小鼠皮肤癌造模20只KM小鼠，在无菌室温下喂养，2~3周龄。动物分为两组： 实验组：在10只实验组小鼠皮肤上，每天1次涂含60%DMBA(二甲基苯蒽)的矿物油，直至10 d;对照组：在10只对照组模型小鼠皮肤上，只涂矿物油,在10 d末处死，经大体检查后切取皮肤[4~12]。

　　2.1.2皮肤癌模型的检测 小鼠皮肤标本制备 所有的皮肤标本用10%中性福尔马林固定，石蜡标本制备，组织切片厚为5 μm，进行常规苏木素和伊红染色。GST-π免疫组织化学染色：运用PAP免疫组织化学染色方法,对不同病变标本的石蜡切片进行染色。PAP显色采用AEC试剂盒，核复染用Mayer/s苏木索。GST-π在小鼠正常皮肤中染色呈阴性,在鳞状细胞癌病变皮肤中显色呈阳性(见表1)。本实验结果表明所造模型为皮肤癌动物模型。表1GST-π在小鼠正常皮肤和病变皮肤中的显色情况

　　2.2 药效评价实验

　　2.2.1供试品溶液的制备 莪术油乳液：1.2 ml莪术油，加60%的乙醇80 ml，再加吐温-80 20 ml，制备成莪术油乳液备用。莪术超声提取乳液：100 g莪术药材，用醇提超声的最佳工艺提取，浓缩，离心除杂30 min(3 000 r/min)，回收乙醇，浓缩至干浸膏，再加60%乙醇稀释至80 ml，再加吐温-80 20 ml，制备成莪术超声提取微乳液备用。莪术水提乳液：100 g莪术药材，水蒸气蒸馏提取挥发油后的水提液，浓缩后，离心除杂30 min(3 000 r/min)，再浓缩至干浸膏，再加60﹪乙醇稀释至80 ml，再加吐温-80 20 ml，制备成莪术水提取微乳液备用。

　　2.2.2实验方法

　　随机分组：将50只KM小鼠按体质量和性别采用“均衡随机”法分成4组，每组10只，雌雄过半，50只小鼠称重，并标记。第1组为对照组，第2组、第3组以及第4组为治疗组。小鼠皮肤癌模型的建立：模型动物组小鼠皮肤上，每天1次涂含60%DMBA(二甲基苯蒽)的矿物油，直至10 d。给药剂量和给药方式：从第11天开始，对照组小鼠皮肤上，每天1次涂生理盐水。第2组每天1次涂莪术超声提取乳液、第3组每天1次涂莪术油乳液以及第4组每天1次涂莪术水提乳液。每次约0.8g左右。