超声提取飞廉悬浮细胞总黄酮的工艺研究

　　2.1.3样品溶液的制备和测定将培养了12 d的飞廉细胞抽滤至不滴水后，放入60℃ 干燥箱烘干约36 h至恒重。将干细胞样品研磨，取0.5 g干细胞粉， 按正交表的设计条件进行超声提取，提取次数为2次，提取液过滤，合并滤液最后定容至25 ml，做为待测液。取1 ml待测液于10 ml容量瓶中，按“2.1.2”的步骤依次加入其它试剂，在510 nm处测得吸光值。按下式计算样品总黄酮含量：X=C×V/m×V1/V2。其中：X-为黄酮含量(mg/g)，以芦丁计;C-根据吸光度得到的样品总黄酮浓度(mg/ml);m-处理样品的质量(g);V-测吸光度时所稀释的容量瓶体积，这里为10 ml;V1-样品处理液的总体积(ml)，这里为25 ml;V2-测定时吸取样品处理液的体积(ml)。

　　2.2正交实验结果正交实验结果极差越大，因素影响越大。由表2可知，影响悬浮培养飞廉细胞中总黄酮提取的因素主次顺序为：乙醇浓度(A) >料液比(B) >提取温度(C) >提取时间(D)，飞廉细胞中总黄酮超声提取的最佳工艺条件为：A2B3C1D2，即乙醇浓度为60%，料液比1∶20，提取温度为60℃，提取时间为30 min。正交实验的方差分析(见表3)结果显示，乙醇浓度对飞廉细胞中总黄酮的提取有极显著性影响，料液比对黄酮提取也有较大的影响，提取时间和温度在此实验范围内没有显著差异，对测定结果的影响较小，与直观分析结果(见表2)相吻合。表2正交实验结果表3正交实验方差分析结果

　　3结论

　　超声波提取法是近年来《中国药典》收载应用较多的一种样品处理方法，具有提取效率高、处理时间短、操作简便等优点[5]。本文首次报道了超声技术在飞廉悬浮细胞总黄酮提取中的应用，并通过正交实验，优化了飞廉细胞中总黄酮的提取工艺,正交实验结果表明超声提取飞廉细胞总黄酮的最佳工艺条件为:乙醇浓度60%，料液比1∶20，提取温度60℃，提取时间30 min。在该最佳超声提取工艺条件下，总黄酮含量达到8.73 mg/g。本研究为更好地开发利用飞廉属植物中黄酮类化合物奠定了良好的基础。

【参考文献】
  　[1]王玉华，温爱平，杨来秀，等.蒙药材飞廉的实验研究[J].内蒙古医学院学报，2009，31(3):219.

　　[2]戴静秋.西北风毛菊、蒙古芯芭、丝毛飞廉三种药用植物化学成分和生物活性的研究[D].兰州:兰州大学，2002 :90.

　　[3]张庆英.生藤和飞廉化学成分及生物活性研究[D]. 北京:北京医科大学，2000:85.

　　[4]黄璐琳，胡尚钦，杨晓.药用植物生物工程研究进展Ⅰ.组织和细胞培养研究[J].中草药，2006，37(4):488.

　　[5]牛立新，李章念，李红卷，等.超声波提取卷丹鳞茎中总黄酮研究[J].中药材，2007，30(1):852.