不同产地野生与栽培掌叶大黄中蒽醌类成分含量的比较

【摘要】  　　目的比较野生与栽培掌叶大黄中蒽醌类成分含量的差异。方法采用高效液相色谱法测定不同产地野生与栽培掌叶大黄中蒽醌类成分的含量，利用聚类分析对测定结果进行分类，通过相关分析研究海拔对掌叶大黄蒽醌类成分含量的影响。结果野生掌叶大黄中芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚的含量范围分别为0.29%～0.67%，0.47%～1.33%，0.25%～0.87%，0.55%～1.00%，0.06%～0.48%；栽培掌叶大黄中芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚的含量范围分别为0%～0.07%，0%～0.06%，0%～0.15%，0%～0.34%，0%～0.08%。聚类分析将野生掌叶大黄与栽培掌叶大黄明显地划为两类。相关分析结果表明，海拔高度对掌叶大黄蒽醌类成分含量有显著影响。结论野生掌叶大黄中蒽醌类成分的含量普遍高于栽培掌叶大黄。掌叶大黄中蒽醌类成分含量随海拔升高而升高。

【关键词】  掌叶大黄； 栽培品和野生品； 蒽醌； 高效液相色谱法

　　Abstract：ObjectiveTo do some comparative study on the contents of anthraquinones between the cultivated and wild samples of Rheum Palmatum. MethodsA reversed-phase HPLC method was established for the determination of contents of aloe-emodin，rhein，emodin，chrysophanol and physcion in cultivated and wild Rheum Palmatum from different regions. The classification was carried out by using the Hierarchical clustering analysis. The correlation analysis was used to study the effect of altitude on the contents of anthraquinones. ResultsThe content range of aloe-emodin，rhein，emodin，chrysophanol and physcion in wild Rheum Palmatum were 0.29％～0.67％，0.47％～1.33％，0.25％～0.87％，0.55％～1.00％，0.06％～0.48%, respectively. The content range of aloe-emodin，rhein，emodin，chrysophanol and physcion in cultivated Rheum Palmatum were 0～0.07％，0～0.06％，0～0.15％，0～0.34％，0～0.08％, respectively. According to the result of classification , all samples collected were divided into two grades the cultivated and the wild. The result of correlation analysis showed that the altitude had significant influence on the contents of anthraquinones in Rheum Palmatum. ConclusionThe contents of aloe-emodin，rhein，emodin，chrysophanol and physcion in the wild Rheum Palmatum are higher than those in the cultivated Rheum Palmatum. with the increase of altitude，the contents of anthraquinones show the tendency of increase.

　　Key words：Rheum palmatum L．;  Cultivated and wild samples;  Anthraquinones;  HPLC
  
　　掌叶大黄Rheum palmatum L．为蓼科大黄属多年生草本植物，以干燥根及根茎入药，是药典中大黄药材的主要来源之一，主要分布在甘肃、四川、青海、宁夏、西藏、陕西等地。大黄味苦，性寒，具有泻热通肠、凉血解毒、逐瘀通经的功效，其有效成分为蒽醌类化合物。由于大黄需求量很大，野生资源日渐减少，现已有多处进行人工栽培。本文参照《中国药典》（2OO5年版Ⅰ部）［1］所载HPLC法测定了栽培和野生掌叶大黄药材中芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚5种蒽醌类成分的含量，并进行了比较研究，为开发利用掌叶大黄资源，确保人工栽培掌叶大黄的品质提供科学依据。

　　1  仪器与试药
  
　　Waters 2695高效液相色谱仪，Waters 2996二极管阵列检测器。甲醇为色谱纯，美国Fisher公司；水为娃哈哈纯净水；其余试剂均为分析纯。芦荟大黄素（批号110795-200605）、大黄酸（批号110757-200206）、大黄素（批号110756-200110）、大黄酚（批号110796-200615）和大黄素甲醚（批号110758-200610）对照品均购自中国药品生物制品检定所。栽培掌叶大黄（二年生）和野生掌叶大黄药材样品由冯成强副教授鉴定为掌叶大黄Rheum palmatum L．的干燥根。

　　2  方法与结果

　　2.1  对照品储备液的制备精密称取芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚对照品各适量，用甲醇分别配制成浓度为109.6，76.0，106.2，155.7 μg·ml-1的对照品储备液，精密称取大黄素甲醚对照品适量，用甲醇－三氯甲烷（9∶1）的混合溶液配制成浓度为65.4 μg·ml-1的对照品储备液。

　　2.2  供试品溶液的制备取掌叶大黄药材粉末(过40目筛)约0.15 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25 ml，称定重量，加热回流1 h，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过。精密量取续滤液5 ml，置烧瓶中，挥去溶剂，加8%的盐酸溶液10 ml，超声处理2 min，再加三氯甲烷10 ml，加热回流1 h，放冷，置分液漏斗中，用少量三氯甲烷洗涤容器，并入分液漏斗，分取三氯甲烷层，酸液再用三氯甲烷提取3次，每次10 ml,合并三氯甲烷液，回收溶剂至干，残渣加甲醇使溶解，转移至10 ml的容量瓶中，加甲醇置刻度，摇匀，经0.45 μm滤膜滤过，取续滤液，即得。

　　2.3  色谱条件色谱柱为Diamonsil C18 (5 μm，4.6 mm×250 mm)；流动相为甲醇-0.1 %磷酸溶液（80∶20）；流速为1 ml·min-1；检测波长254 nm；柱温：30 ℃；进样量10 μl。在本色谱条件下，芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚和大黄素甲醚分离良好。色谱图见图1。

　　2.4  线性关系考察精密量取芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚对照品储备液适量，采用倍比稀释法，分别用甲醇制成系列浓度的溶液，分别吸取上述系列溶液各10 μl，按上述色谱条件进行分析，测定峰面积。以峰面积(Y)为纵坐标，对照品浓度(X)为横坐标，进行线性回归，结果表明5个被测化合物在各自标准曲线范围内线性关系良好。回归方程分别为：芦荟大黄素Y=4.68×104X – 2.63×103，r=0.999 8；大黄酸Y=4.13×104X-3.70×103，r=0.999 8；大黄素Y=3.60×104X-2.89×103，r=0.999 8；大黄酚Y=5.29×104X+7.07×102，r=0.999 8；大黄素甲醚Y=3.45×104X–2.82×103，r=0.999 9。芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚和大黄素甲醚的线性范围分别是0.548～54.8，0.76～76.0，1.06～53.1，1.56～77.8，0.82～32.7 μg·ml-1。

　　2.5  精密度实验取同一供试品溶液，在上述色谱条件下重复进样6次，芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚和大黄素甲醚峰面积的RSD分别0.91%，1.5%，0.83%，1.6%，1.8%。

　　2.6  重复性实验精密称取同一大黄药材粉末6份，每份0.15 g，按“2.2”项下方法制备供试品溶液，在上述色谱条件下进行分析测定，芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚和大黄素甲醚含量的RSD分别为2.7%，2.6%，2.4%，2.7%，2.9%。