电针对局灶性脑缺血模型大鼠脑内STAT1阳性神经元的影响
作者：于涛，许能贵 ，符文彬，易玮，徐振华，付雪松
【摘要】 目的研究脑缺血后STAT1在病灶局部的调控机制以及电针的干预影响。方法采用热凝法制成MCAO模型，采用免疫组织化学的方法检测不同时间段STAT1在病灶侧皮质、海马CA1区的调控机制以及电针的干预结果。结果模型24 h组多个指标稍有增高;模型组3 d组指标均有显著的增高(P<0.05)。电针组中电针2 h组、电针24 h与模型组无显著性差异(P>0.05);电针3 d组明显低于与模型组，差异有显著性(P<0.05或P<0.001)。结论电针治疗可以抑制脑缺血后的STAT1水平，这可能是其治疗脑缺血、改善受损脑功能的一个重要途径。
【关键词】 电针;脑缺血;STAT1
在脑缺血引起的局部炎性反应中，JAKs-STATs家族的信号传导对病灶区细胞凋亡过程起着重要的作用，其中STAT1激活可能与细胞凋亡相关 [1]。因此，研究脑内STAT1在脑缺血后的调控机制以及电针的干预作用，对了解电针治疗对脑缺血的内在干预机制有着一定的意义。
1动物和材料
1.1动物分组广州中医药大学动物实验中心SPF级SD大鼠90只[合格证号NO031878，许可证号SYXK(粤)，2008-0020]，均为雄性，体质量(220±20)g。由随机数字表法随机分为假手术组(J组)、模型组(M组)和电针组(Z组)，每组又分为2 h，24 h，3 d 3个时间段组。
1.2试剂和材料兔抗STAT1一抗(博士德公司出品)，免疫组化染色试剂盒(即用型SABC) (博士德公司出品)，Leica冰冻切片机(德国Leica公司)，Leica倒置显微镜及图像处理系统(德国Leica公司)。
2方法
2.1制模方法采用的热凝闭大脑中动脉致局灶性脑缺血MCOA模型[2]。假手术者只暴露大鼠大脑中动脉，不予凝闭。
2.2电针干预方法电针组选取督脉经穴百会(GV20)、大椎(GV14)两穴，其定位参照大鼠的常用针灸穴位[3]。以1寸毫针向后斜刺百会0.5寸，直刺大椎0.3寸，两穴接上电针，用疏密波，5～10次/s，强度以大鼠安静耐受为度，约2～3 V，时间30 min，1 d/次。Z2 h组在手术后1 h进行电针治疗，电针30 min，治疗后30 min后处死灌流固定、Z24h组在造模后24 h后处理;Z3 d组在同一时间治疗3 d后处理。假手术组和模型组均在相应的时间进行处理。
2.3实验方法每组大鼠在干预结束后用10%水合氯醛麻醉，常规灌注固定。第2天，取脑组织进行冠状冰冻切片，片厚40 μm。收集于0.1M PB (pH 7.4)中备用。在实验中，因麻醉意外，M24 h组死亡2只，M3 d组死亡1只，Z2 h组死亡1只。STAT1免疫组织化学方法将严格按说明书操作。对照实验以正常羊血清和PBS代替一抗，同步进行上述免疫组织化学染色，结果为阴性。
2.4图像分析及统计学处理确定标记的部位，在目镜10×和物镜40×的视野下，应用Leica-Qwin图像分析系统测定梗塞周围区和同侧海马CA1区的阳性细胞数、平均截面积、平均光密度值进行半定量分析。每个区域测3个不同视野，取其均值。统计使用SPSS11.5软件包中单因素ANOVA计算法和最小显著性差异(LSD)检验法来进行均数的显著性检验，方差齐性检验水平α1=0.1，显著性检验水平α2=0.05。
3结果
各组大鼠病灶侧皮质区和病灶侧海马CA1区STAT1免疫阳性细胞的定量分析见表1～2。表1显示，在病灶侧皮质区，假手术组3个组在STAT1阳性细胞数、平均截面积、平均光密度值3个指组间均无显著性差异(P>0.05);模型组中M2 h在3个指标方面与J2h无明显差异(P>0.05)，M24 h组较M2 h组在3个指标的数值上均有一定程度地升高，但两者相较均无明显差异(P>0.05)，与J24 h比较亦然;M3d各数值较前两组均有明显的升高，与M2 h和J3 d之间比较在3指标上均有显著性差异(P<0.001);电针组方面：3指标Z2 h与J2 h、M2 h以及Z24 h与J24 h、M24 h间均无显著性差异(P>0.05);Z3 d与J3 d间也均无显著性差异(P>0.05)，但与M3 d比较差异均有显著性(P<0.001)。表1病灶侧皮质区STAT1免疫阳性细胞形态学参数表2病灶侧海马CA1区STAT1免疫阳性细胞形态学参数表2的数值和表1基本一致，假手术组3个组在STAT1阳性细胞数、平均截面积、平均光密度值3个指组间均无显著性差异(P>0.05);模型组中M24 h组开始有一定程度地升高，M3 d明显升高，与J3 d比较差异有显著性(P<0.001);电针组方面：Z24 h与Z3 d均与模型组低， 其中Z3 d与M3 d比较差异均有显著性(P<0.01至P<0.001)。